長江師范學院曾靜獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉長江師范學院申請的專利一種基于農桿菌介導法的莖瘤芥高效遺傳轉化方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115873894B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-08發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202211682983.2,技術領域涉及:C12N15/82;該發明授權一種基于農桿菌介導法的莖瘤芥高效遺傳轉化方法是由曾靜;劉義華;莫言玲;陳靜靜設計研發完成,并于2022-12-27向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種基于農桿菌介導法的莖瘤芥高效遺傳轉化方法在說明書摘要公布了:本發明涉及莖瘤芥高效遺傳轉化技術領域,公開了一種基于農桿菌介導法的莖瘤芥高效遺傳轉化方法,包括一再生體系建立,采用添加6?BA和NAA的培養基對莖瘤芥外植體進行誘導,獲得莖瘤芥再生體系;二遺傳轉化體系建立,截取無菌的外植體置于含農桿菌的浸染液中浸染,并將浸染后的外植體經愈傷組織誘導?不定芽分化?生根培養?煉苗,形成莖瘤芥遺傳轉化體系。本方案通過在再生體系建立時以不同濃度的6?BA即6?芐氨基嘌呤和NAA即α?萘乙酸組合,對不同莖瘤芥外植體的誘導進行優化篩選,從而獲得具有更高誘導率的6?BA和NAA濃度組合,可獲得誘導率高達86%的再生體系,從而便于顯著提升莖瘤芥轉化率。
本發明授權一種基于農桿菌介導法的莖瘤芥高效遺傳轉化方法在權利要求書中公布了:1.一種基于農桿菌介導法的莖瘤芥高效遺傳轉化方法,其特征在于:包括(一)再生體系建立,采用添加6-BA和NAA的培養基對莖瘤芥外植體進行誘導,獲得莖瘤芥再生體系;(二)遺傳轉化體系建立,取無菌外植體置于含農桿菌的浸染液中浸染,并將浸染后的外植體經添加6-BA、NAA和抗生素的培養基進行誘導,獲得莖瘤芥遺傳轉化體系; 所述遺傳轉化體系建立,包括如下步驟: 步驟一:播種,取滅菌的莖瘤芥種子播種于種子萌發培養基M1中; 步驟二:浸染,將外植體置于含農桿菌的浸染液中浸染;浸染液為采用30%無菌蔗糖溶液重懸含有p130035S-BjuSPL10c-GFP載體的農桿菌,浸染為將外植體置于OD600值為0.05 的浸染液中浸染10min; 步驟三:愈傷誘導,切取播種所得莖瘤芥的部分組織作為外植體接種于愈傷組織誘導培養基M2’中,誘導獲得愈傷組織;所述M2’為MS+2mgL6-BA+0.15mgLNAA+20mgL潮霉素+500mgL特美汀+0.8%瓊脂; 步驟四:不定芽誘導,將上述愈傷組織接種于新的愈傷組織誘導培養基M2’中繼續培養,獲得不定芽; 步驟五:生根誘導,將上述不定芽接種于生根培養基M3’中進行生根培養,獲得再生苗;所述M3’為12MS+0.1mgLNAA+20mgL潮霉素+500mgL特美汀+0.8%瓊脂; 步驟六:煉苗,將再生苗移栽至營養土中,獲得再生植株,建立莖瘤芥遺傳轉化體系。
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