浙江農林大學崔富強獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉浙江農林大學申請的專利一種根癌農桿菌介導的歐洲越橘轉基因體系的建立方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115873897B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-12發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202211207981.8,技術領域涉及:C12N15/84;該發明授權一種根癌農桿菌介導的歐洲越橘轉基因體系的建立方法是由崔富強;宋艷平設計研發完成,并于2022-09-30向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種根癌農桿菌介導的歐洲越橘轉基因體系的建立方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種根癌農桿菌介導的歐洲越橘轉基因體系的建立方法,該方法包括:取歐洲越橘莖葉作為外植體,誘導其長出一層薄薄的愈傷組織;將該帶有一層薄薄愈傷組織的外植體材料放入加有生長素IBA、細胞分裂素ZT和乙酰丁香酮的農桿菌侵染液中進行侵染培養,侵染培養過程中對材料進行超聲破碎和真空滲透等處理,促進農桿菌質粒進入植物材料;然后將侵染后的外植體材料進行共培養后再將轉基因材料移至篩選培養基中進行篩選,最終獲得表現出報告基因甜菜素合成基因所呈現的洋紅色玫紅色歐洲越橘愈傷組織。本發明采用特定的愈傷誘導培養基、農桿菌侵染處理、共培養培養基、共培養時間、抗性愈傷組織篩選培養基等進行根癌農桿菌介導的歐洲越橘愈傷組織轉基因體系的構建,得到了轉基因成功的玫紅色愈傷組織,并且轉化率也提高至4%。
本發明授權一種根癌農桿菌介導的歐洲越橘轉基因體系的建立方法在權利要求書中公布了:1.一種根癌農桿菌介導的歐洲越橘轉基因體系的建立方法,其特征在于,包括: (1)以在無菌培養基上生長良好的歐洲越橘苗的幼嫩葉片為外植體材料,將該外植體材料切成合適大小,接種至誘導愈傷的培養基中培養,得到有愈傷的外植體;所用培養基配方為:WPM+3%蔗糖+1%瓊脂+0.50mgLIBA+2.0mgLZT,pH=5.2±0.02; (2)材料在再生培養基中生長10-14d后將其作為侵染材料,然后將其放入準備好的農桿菌侵染液中進行侵染培養;所述侵染液為:加入1.4mgLIBA、4mgLZT、10mgLAS的WPM溶液;所述侵染培養條件為:28℃搖床先搖20-30min,再對材料進行振幅60%的超聲破碎1min和真空滲透3次,每次5min,之后再28℃搖床搖2h; (3)待侵染培養結束后,倒出侵染液,將侵染完成的材料在濾紙上晾干,放入共培養培養基中,進行共培養;所述共培養培養基為:WPM+3%蔗糖+0.85%瓊脂+0.70mgLIBA+2.0mgLZT+20mgLAS,pH=5.2±0.02; (4)共培養結束后,用無菌RO水清洗轉基因材料,晾干后將其放入篩選培養基中進行篩選培養,直至轉基因材料愈傷組織越長越大,并表現出甜菜素合成報告基因所呈現的洋紅色;所述篩選培養基為:WPM+3%蔗糖+0.85%瓊脂+0.70mgLIBA+2.0mgLZT+5mgLHYG+400mgLCarb,pH=5.2±0.02。
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