四川大學祝頌松獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉四川大學申請的專利一種顳下頜關節盤干細胞分離培養方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116376819B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-08發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202310108930.8,技術領域涉及:C12N5/0775;該發明授權一種顳下頜關節盤干細胞分離培養方法是由祝頌松;王藝儒;畢瑞野;王鵬;李昊翰;方涵;楊仙妮;李倩琍設計研發完成,并于2023-02-09向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種顳下頜關節盤干細胞分離培養方法在說明書摘要公布了:本發明屬于細胞培養技術領域,本發明提供了一種顳下頜關節盤干細胞分離培養方法。本發明方法包括取樣、樣本處理、酶消化、獲取單細胞懸液、關節盤干細胞的分選、原代細胞種板和傳代培養幾個步驟。本發明方法具有提取時間短、加快實驗周期、適用范圍廣,能應用于珍稀樣本或者體積微小樣本等優勢。本發明通過磁珠分選CD90陽性細胞來獲得關節盤干細胞,并且符合間充質干細胞標準,為未來關節盤干細胞治療提供支持。
本發明授權一種顳下頜關節盤干細胞分離培養方法在權利要求書中公布了:1.一種顳下頜關節盤干細胞分離培養方法,其特征在于,包括如下步驟: (1)取樣:將顳下頜關節盤放入緩沖液中清洗后,去除附著在關節盤周圍的關節囊部分,得關節盤樣本; (2)樣本處理:將所述關節盤樣本放入緩沖液中清洗2~4次,洗去關節盤表面血凝塊、組織碎片和雜質,棄去緩沖液; (3)酶消化:加入含鏈霉蛋白酶儲存液的α-MEM溶液消化0.8~1.2h,離心棄上清,再加入含膠原酶P儲存液的α-MEM溶液消化40~60min,得消化液;所述含鏈霉蛋白酶儲存液的α-MEM溶液中鏈霉蛋白酶的終濃度為3~5mgml,所述含膠原酶P儲存液的α-MEM溶液中膠原酶P的終濃度為2~3mgml; (4)獲取單細胞懸液:加入所述消化液兩倍體積的細胞完全培養基終止酶消化反應,過濾,獲得單細胞懸液; (5)關節盤干細胞的分選:將所述單細胞懸液離心棄上清,用85~95μL磁珠分選緩沖液和8~12μLCD90.2磁珠標記細胞,避光孵育后,加入0.8~1.2mL磁珠分選緩沖液,收集CD90+細胞即為關節盤干細胞; (6)原代細胞種板:將所得關節盤干細胞種板,加入細胞完全培養基進行培養; (7)傳代培養:每2~4天換液一次,至細胞融合度≥80%,移去舊培養基,胰蛋白酶消化1~2min,進行傳代培養。
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