江南大學陸震鳴獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉江南大學申請的專利一種快速檢測8種海洋芽孢桿菌的方法及其在發酵食品中的應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115343272B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-08發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202210973277.7,技術領域涉及:G01N21/65;該發明授權一種快速檢測8種海洋芽孢桿菌的方法及其在發酵食品中的應用是由陸震鳴;許正宏;徐蕾;梁源;柴麗娟;張曉娟;史勁松設計研發完成,并于2022-08-15向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種快速檢測8種海洋芽孢桿菌的方法及其在發酵食品中的應用在說明書摘要公布了:本發明公開了一種快速檢測8種海洋芽孢桿菌的方法及其在發酵食品中的應用,屬于微生物檢測與生態學應用領域。采用本發明的方法對8株海洋芽孢桿菌進行拉曼檢測,利用海洋芽孢桿菌的特征波段建立訓練模型對未知菌株鑒別。該方法應用到大曲中利用梯度離心、均質或渦旋的方式制備大曲菌懸液樣品,單細胞進行拉曼檢測,利用建立的海洋芽孢桿菌訓練模型對未知細菌的拉曼光譜進行機器學習預測菌株的類型,實現大曲中海洋芽孢桿菌實時、快速、無標記檢測,確定其海洋芽孢桿菌類型,該檢測分析時間可縮短到幾分鐘。
本發明授權一種快速檢測8種海洋芽孢桿菌的方法及其在發酵食品中的應用在權利要求書中公布了:1.一種用于鑒定海洋芽孢桿菌菌株種類的神經網絡判別分析分類模型,其特征在于,所述神經網絡模型是按照下述步驟建立的: (1)海洋芽孢桿菌菌懸液的制備: 分別將Oceanobacilluscaeni、Oceanobacilluskimchii、Oceanobacillus iheyensis、Oceanobacillussojae、Oceanobacillusoncorhynchi、Oceanobacillus profundus、Oceanobacillusjeddahense、Oceanobacilluskapialis菌株接種至培養基中進行發酵培養,分別取不同培養時間的培養液,即為海洋芽孢桿菌菌懸液; (2)海洋芽孢桿菌菌懸液的預處理: 分別將步驟(1)制備得到的菌懸液離心后,取沉淀,將沉淀加入無菌水后離心,重復2~3次后,得到預處理后的海洋芽孢桿菌菌懸液; (3)金納米粒的制備: 利用檸檬酸三鈉加熱還原法,向燒瓶內加入超純水與濃度為10mgmL的氯金酸鉀溶液,混合均勻后加熱至沸騰后,迅速加0.1%檸檬酸三鈉溶液,繼續保持沸騰,當觀察到溶液呈現紫紅色時停止加熱,得到金納米粒,所得金納米粒徑為10~50nm; (4)拉曼光譜檢測: 將步驟(2)得到的海洋芽孢桿菌菌懸液與步驟(3)得到的金納米?;靹蚝筮M行單細胞拉曼光譜的采集,其中,光譜采集條件為:使用532nm激光,掃描光譜范圍為500~3750cm-1,激光強度為1~300mW,采集時間為1~20s次,累積次數1次,不同培養時間的海洋芽孢桿菌菌懸液分別采集50~2000個細胞; (5)單細胞拉曼光譜數據的處理: 將步驟(4)得到的單細胞拉曼光譜數據進行宇宙射線的消除、背景噪音的去除、對基線進行校正處理、Savitzky-Golay平滑并對所有的數據進行歸一化處理; (6)構建模型: 使用機器學習對海洋芽孢桿菌菌株建立神經網絡判別分析分類模型:使用神經網絡機器學習算法,將步驟(5)得到的海洋芽孢桿菌單細胞拉曼光譜數據,選擇744cm-1、746cm-1、748cm-1、750cm-1、1128cm-1、1130cm-1、1304cm-1、1314cm-1、1316cm-1、1480cm-1、1482cm-1、1580cm-1、1582cm-1、1586cm-1、1588cm-1、1670cm-1、1678cm-1、1680cm-1特征波段進行機器學習,設置訓練數據集和檢測數據集,其中,訓練數據集為收集數據的70%,檢測數據集為收集數據的30%; 所述神經網絡機器學習算法的參數為:隱藏層為100,激活函數使用ReLu,優化器為Adam,學習率0.0001; 所述海洋芽孢桿菌為OceanobacilluscaeniCGMCC1.10860、Oceanobacillus kimchiiJCM16803、OceanobacillusiheyensisCGMCC1.8643、OceanobacillussojaeNBRC105379、OceanobacillusoncorhynchiCGMCC1.8877、OceanobacillusprofundusCGMCC1.15219、OceanobacillusjeddahenseDSM28586、OceanobacilluskapialisDSM23158; 步驟(1)中的不同培養時間為培養6h、12h、24h得到的培養液; 步驟(4)中的取菌懸液與金納米?;旌虾笾糜诶酒?,吹干后進行拉曼光譜的檢測;金納米粒與菌懸液混合體積比為(1:1)~(1:1×105)。
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