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龍圖騰網(wǎng)獲悉南京啟真基因工程有限公司申請(qǐng)的專利用于構(gòu)建OCA-1A型白化病模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN115232834B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-08發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202110774036.5，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N15/85；該發(fā)明授權(quán)用于構(gòu)建OCA-1A型白化病模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用是由牛冬;汪滔;劉璐;馬翔;陶裴裴;曾為俊;王磊;程銳;趙澤英;黃彩云;段星設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2021-07-08向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本用于構(gòu)建OCA-1A型白化病模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了用于構(gòu)建OCA?1A型白化病模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種制備重組細(xì)胞的方法：用SEQIDNO：18所示的DNA分子取代豬細(xì)胞的染色體DNA中SEQIDNO：19所示的DNA分子，得到重組細(xì)胞。實(shí)現(xiàn)方式：將靶序列結(jié)合區(qū)如SEQIDNO：16中第3?22位核苷酸所示的TYR?gRNA1、靶序列結(jié)合區(qū)如SEQIDNO：17中第3?22位核苷酸所示的TYR?gRNA2、SEQIDNO：18所示的TYR?E1mut?ss126和NCN蛋白共轉(zhuǎn)染豬細(xì)胞。本發(fā)明對(duì)于研發(fā)OCA?1A型白化病藥物的研發(fā)及揭示該病的發(fā)病機(jī)制具有重大應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明授權(quán)用于構(gòu)建OCA-1A型白化病模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用在權(quán)利要求書中公布了：1.一種制備重組細(xì)胞的方法，包括如下步驟：用SEQIDNO：18所示的DNA分子取代豬成纖維細(xì)胞的染色體DNA中SEQIDNO：19所示的DNA分子，得到重組細(xì)胞； 用SEQIDNO：18所示的DNA分子取代豬成纖維細(xì)胞的染色體DNA中SEQIDNO：19所示的DNA分子的實(shí)現(xiàn)方式為：將TYR-gRNA1、TYR-gRNA2、TYR-E1mut-ss126和NCN蛋白共轉(zhuǎn)染豬成纖維細(xì)胞；所述TYR-gRNA1為sgRNA，其靶序列結(jié)合區(qū)如SEQIDNO：16中第3-22位核苷酸所示；所述TYR-gRNA2為sgRNA，其靶序列結(jié)合區(qū)如SEQIDNO：17中第3-22位核苷酸所示；所述TYR-E1mut-ss126為SEQIDNO：18所示的單鏈DNA分子； 所述NCN蛋白如SEQIDNO：3所示； 所述NCN蛋白的制備方法包括如下步驟： 1將質(zhì)粒pKG-GE4導(dǎo)入大腸桿菌BL21DE3，得到重組菌； 2采用液體培養(yǎng)基30℃培養(yǎng)所述重組菌，然后加入IPTG并25℃誘導(dǎo)培養(yǎng)，然后收集菌體； 3將收集的菌體進(jìn)行菌體破碎，收集粗蛋白溶液； 4采用親和層析從所述粗蛋白溶液中純化具有His6標(biāo)簽的融合蛋白； 5采用具有His6標(biāo)簽的腸激酶酶切具有His6標(biāo)簽的融合蛋白，然后采用Ni-NTA樹脂去除具有His6標(biāo)簽的蛋白，得到純化的NCN蛋白； 所述質(zhì)粒pKG-GE4如SEQIDNO：1所示。

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