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龍圖騰網獲悉恢春丹生物科技(海南)有限公司申請的專利一種用于抗衰老的干細胞外泌體的培養方法及其應用獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN120137892B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-12發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202510591693.4，技術領域涉及：C12N5/0775；該發明授權一種用于抗衰老的干細胞外泌體的培養方法及其應用是由鄭寶權;趙玲;鄭金昕;孫濱;鄭菲設計研發完成，并于2025-05-09向國家知識產權局提交的專利申請。

本一種用于抗衰老的干細胞外泌體的培養方法及其應用在說明書摘要公布了：本發明屬于生物醫藥或保健品領域，具體公開了一種用于抗衰老的干細胞外泌體培養方法及其應用。所述方法通過低氧（5%?8%O?）預培養聯合旋轉式三維動態培養，顯著提升外泌體產量至2.1×1011particlesmL；分階段添加TGF?β1、IFN?γ及NMN，協同激活免疫調節通路，使TGF?β1含量達8.5ngμg。外泌體與活性成分（維生素C乙基醚、Q10、蝦青素）共同包埋于脂質體（HSPC:膽固醇=7:3）中，口服后胃液穩定性達92.3%，腸道吸收率提升至80%。實驗表明，該組合物可提高老年小鼠脾臟Treg比例35%，降低IL?6水平48%，并改善皮膚屏障功能（TEWL降低40%）。長期毒性實驗證實其安全性（ALT無異常）。本發明在抗衰老領域具有顯著的技術進步和臨床應用潛力。

本發明授權一種用于抗衰老的干細胞外泌體的培養方法及其應用在權利要求書中公布了：1.一種用于抗衰老的干細胞外泌體的培養方法，其特征在于，包括以下步驟： （a）將間充質干細胞以5×104-1×105cellscm2的接種密度接種于含5%-10%血清替代物的DMEMF12培養基中，在氧氣濃度為5%-8%的低氧環境下預培養24-48小時； （b）向培養基中添加細胞因子組合，所述細胞因子組合為終濃度為10-20ngmL的TGF-β1、5-15ngmL的IFN-γ及1-5μM的煙酰胺單核苷酸NMN； （c）將培養體系轉移至旋轉式生物反應器中，以0.5-2rpm的轉速進行動態三維培養72-120小時，控制溫度為37±0.5℃，并通過CO2緩沖系統維持pH值在7.2-7.4； （d）收集培養上清液，依次通過2000×g離心10-20分鐘去除細胞碎片、100,000×g超速離心1-2小時富集外泌體，再經尺寸排阻色譜柱SepharoseCL-4B純化，獲得粒徑為50-150nm的外泌體懸液； （e）將步驟（d）所得外泌體懸液與凍干保護劑按體積比1:1混合，所述凍干保護劑為5wt%海藻糖、2wt%甘露醇及0.1wt%人血清白蛋白HSA，經預凍-80℃,2小時后，在真空度≤10Pa、冷阱溫度-50℃條件下冷凍干燥24-36小時，獲得干細胞外泌體凍干粉，復溶后蛋白回收率≥85%； 步驟（a）中的培養基中添加有0.1-0.5mM的抗氧化劑沒食子酸丙酯PG； 步驟（b）中所述細胞因子組合的添加方式為分階段脈沖式添加，具體為：在第0小時加入TGF-β1，在第24小時加入IFN-γ，并在第48小時補充NMN； 步驟（c）中所述旋轉式生物反應器的內壁涂覆有膠原蛋白和透明質酸復合支架，支架孔隙率為80-90%； 步驟（d）中所述尺寸排阻色譜的洗脫液為含1%人血清白蛋白HSA的PBS緩沖液，洗脫流速為0.5-1mLmin。

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