安徽大學綠色產業創新研究院施昊獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉安徽大學綠色產業創新研究院申請的專利一種貽貝蛋白的生物轉化生產方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115747246B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-15發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202211423770.8,技術領域涉及:C12N15/81;該發明授權一種貽貝蛋白的生物轉化生產方法是由施昊;張義玲;羅學才;尹若春設計研發完成,并于2022-11-15向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種貽貝蛋白的生物轉化生產方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種貽貝蛋白的生物轉化生產方法,涉及基因工程、發酵工程與應用生物學領域,具體步驟為:1構建包含貽貝蛋白前體的工程菌株;2將所述工程菌株經過活化和擴大化培養后進行蛋白發酵表達,發酵結束后,破碎菌體,使用親和層析柱純化發酵產物,獲得純化產物;3將所述純化產物加入復合轉化酶體系,進行酶轉化,酶轉化結束后,使用親和層析柱,分離純化轉化產物,將純化產物冷凍干燥,溶于酸性溶液中,獲得貽貝蛋白。整個貽貝蛋白合成及重組過程中,真核生物的表達量高,發酵液中目標產物濃度大,經酶法重組后貽貝蛋白的生物學活性與天然貽貝蛋白類似。
本發明授權一種貽貝蛋白的生物轉化生產方法在權利要求書中公布了:1.一種貽貝蛋白的生物轉化生產方法,其特征在于,具體包括以下步驟: (1)根據貽貝蛋白前體表達菌株的密碼子偏好性設計貽貝蛋白前體氨基酸序列的編碼基因序列,所述貽貝蛋白前體表達菌株為酵母菌(Saccharomyces),所述貽貝蛋白前體氨基酸序列如序列表中SEQIDNO.1所示,將基因序列連接至PET28a載體上并轉入大腸桿菌DH5α中,經過篩選擴培,抽提質粒并進行雙酶切驗證、回收,獲得目的序列,將目的序列連接到載體質粒上,轉化受體菌,獲得工程菌株; (2)將所述工程菌株經過活化和擴大化培養后進行發酵表達,發酵結束后,破碎菌體,使用親和層析柱純化發酵產物,獲得純化產物; (3)將所述純化產物加入復合轉化酶體系,進行酶轉化,所述復合轉化酶系組成按質量比,包括以下任意一種:(a)辣根過氧化物酶:葡萄糖氧化酶:SOD酶=1:1:2;(b)錳過氧化氫酶:SOD酶:酪氨酸酶=1:2:2;(c)VC氧化酶:葡萄糖氧化酶:SOD酶=2:2:1;(d)辣根過氧化物酶:錳過氧化氫酶:葡萄糖氧化酶=2:1:3,酶轉化結束后,使用親和層析柱,分離純化轉化產物,將純化產物冷凍干燥,溶于1%檸檬酸溶液中,獲得貽貝蛋白。
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