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龍圖騰網獲悉北京大學申請的專利一種研究Cas9蛋白識別靶基因位點時構象變化的方法獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN115466780B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-15發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202110647509.5，技術領域涉及：C12Q1/6818；該發明授權一種研究Cas9蛋白識別靶基因位點時構象變化的方法是由陳匡時;吳若楠;秦金珊;吳小天設計研發完成，并于2021-06-10向國家知識產權局提交的專利申請。

本一種研究Cas9蛋白識別靶基因位點時構象變化的方法在說明書摘要公布了：本發明公開了一種研究Cas9蛋白識別靶基因位點時構象變化的方法，通過改造sgRNA的SL2區域使Cas9蛋白能夠固定于玻片上并且保持功能，并對Cas9蛋白的突變型C80SS355CC574SS867C進行FRET熒光對標記，從而能夠基于單分子熒光共振能量轉移真實地反映Cas9構象狀態，為體外研究CRISPRCas9體系的結構?功能關系提供了有效手段，對設計具有優化性質的Cas9并使其發揮新的功能具有重要意義。

本發明授權一種研究Cas9蛋白識別靶基因位點時構象變化的方法在權利要求書中公布了：1.一種研究Cas9蛋白識別靶基因位點時構象變化的方法，包括： 1）在sgRNA的SL2區域中插入一段特殊序列TS，使其可與生物素修飾的寡核苷酸biotin-oligo雜交互補，并通過體外轉錄獲得改造后的sgRNA，命名為SL2-sgRNA-TS；其中，所述TS是與sgRNA無關的序列，其長度為20~60nt； 2）制備生物素修飾的寡核苷酸biotin-oligo，該寡核苷酸含有與TS雜交互補的序列； 3）制備Cas9蛋白或dCas9蛋白的突變型C80SS355CC574SS867C，并對突變型蛋白進行FRET熒光對標記； 4）制備靶標雙鏈DNA，該靶標雙鏈DNA含有與SL2-sgRNA-TS的spacer序列互補的靶標序列及與其相鄰的PAM序列； 5）在蓋玻片表面修飾上帶有生物素的聚乙二醇Biotin-PEG，獲得功能化蓋玻片，然后在該功能化蓋玻片表面孵育中性親和素，使之與蓋玻片表面的Biotin-PEG結合；再在修飾有中性親和素的功能化蓋玻片上孵育步驟2）制備的biotin-oligo，通過生物素與中性親和素的反應將biotin-oligo連接在蓋玻片上； 6）將步驟3）制備的Cas9蛋白或dCas9蛋白的突變型與步驟1）獲得的SL2-sgRNA-TS在體外混合孵育，其中蛋白與sgRNA的摩爾比大于5:1，形成Cas9sgRNA復合物或dCas9sgRNA復合物；同時，將Cas9蛋白或dCas9蛋白的突變型與SL2-sgRNA-TS、靶標雙鏈DNA在體外混合孵育，其中蛋白與sgRNA摩爾比大于5:1，靶標雙鏈DNA與sgRNA摩爾比大于2:1，形成Cas9sgRNADNA復合物或dCas9sgRNADNA復合物； 7）分別將步驟6）獲得的復合物在步驟5）獲得的蓋玻片上孵育，通過biotin-oligo與SL2-sgRNA-TS中TS的雜交互補，將復合物特異性連接在蓋玻片表面； 8）通過全內反射熒光顯微鏡采集步驟7）處理后的蓋玻片表面的單分子FRET熒光信號，通過對單分子FRET效率的分析來解析Cas9或dCas9在不同狀態下的構象變化。

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