四川大學華西醫院鄧洪新獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉四川大學華西醫院申請的專利一種共分化的血管化胰島類器官及其構建方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN120158422B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-19發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510649810.8,技術領域涉及:C12N5/071;該發明授權一種共分化的血管化胰島類器官及其構建方法是由鄧洪新;陳雙;柴茂月;張琳;任玉霜;魏于全設計研發完成,并于2025-05-20向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種共分化的血管化胰島類器官及其構建方法在說明書摘要公布了:本發明屬于類器官培養技術領域,具體涉及一種共分化的血管化胰島類器官及其構建方法。針對現有胰島類器官血管化大多采用共培養方式,操作流程長、難度大,且具有隨機性,均一性差等問題,本發明提供了一種共分化的血管化胰島類器官的構建方法,采用人誘導性多能干細胞hiPSCs,依次誘導培養成定向內胚層細胞、原始腸管細胞和后前腸細胞,在之后的誘導分化中,加入含VEGF、BMP4和FGF2的培養基培養,獲得共分化的血管化胰島類器官。本發明首次在不添加外源內皮細胞的條件下,將iPS細胞定向分化產生含β、α、δ細胞及血管內皮細胞的血管化胰島類器官,它比非血管化胰島類器官更成熟,分泌胰島素功能更強,為實現糖尿病功能治愈提供新思路和實驗依據。
本發明授權一種共分化的血管化胰島類器官及其構建方法在權利要求書中公布了:1.共分化的血管化胰島類器官的構建方法,其特征在于,包括以下步驟: 取人誘導性多能干細胞hiPSCs,加入培養基S1誘導培養成定向內胚層細胞、加入培養基S2培養成原始腸管細胞,加入培養基S3培養成后前腸細胞,在后前腸細胞向胰腺祖細胞分化過程中,加入含血管內皮生長因子VEGF的S4培養基誘導培養5-10天;再加入含VEGF、骨成型蛋白4BMP4和堿性成纖維細胞生長因子FGF2的S5培養基誘導培養5-10天,獲得血管化胰腺內分泌前體細胞;再加入含VEGF的S6培養基誘導培養5-10天,最終獲得共分化的血管化胰島類器官;所述S4培養基的組成包括:DMEM基礎培養基中,加入終濃度為0.5-2%的谷氨酰胺、0.5-2%的無血清添加劑B27、50-200UmL的青霉素-鏈霉素、50-200ngml的表皮細胞生長因子EGF、0.1-0.5μM的苯并內酰胺衍生的蛋白激酶C活化物TPPB、5-20mM的尼克酰胺、0.1-1μM的E-N-4-芐基-1-哌嗪基-1-3,5-二甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基甲亞胺SANT1、0.1-1mM的維生素C、10-100ngmL的VEGF和5-20uM的ROCK抑制劑Y27632;所述的S5培養基的組成包括:DMEM基礎培養基中,加入終濃度為0.5-2%的谷氨酰胺、0.5-2%的B27、50-200UmL的青霉素-鏈霉素、5-20μM的ALK5抑制劑II、0.1-1μM的BMPI型受體抑制劑LDN193189、0.1-3μM的3,3′,5-三碘代-L-甲狀腺原氨酸T3、5-20μM的Isoxazole9、5-20μgmL的肝素鈉、0.5-3μM的γ分泌酶抑制劑XXi、50-200nM的PORCN抑制劑Wnt-C59、5-20uM的Y27632、10-200ngmL的VEGF、5-100ngmL的BMP4、5-100ngmL的FGF2和0.1-1mM的維生素C;所述的S6培養基的組成包括:DMEM基礎培養基中,加入終濃度為0.5-2%的B27、50-200UmL的青霉素-鏈霉素、5-20μM的ALK5抑制劑II、0.1-1μM的貝森替尼、0.1-3μM的T3、5-20μM的佛司可林、5-20μgmL的肝素鈉、5-20μM的硫酸鋅、0.5-5mM的N-乙酰-L-半胱氨酸、10-100ngmL的VEGF和0.1-1mM的維生素C;所述的培養基S1的組成包括:RPIM1640基礎培養基中,加入終濃度為0.2%的胎牛血清、100UmL的青霉素-鏈霉素、1%的谷氨酰胺、0.02%的ITS-X、100ngmL的ActivinA和50ngmL的Wnt3A;所述的培養基S2的組成包括:DMEMF12基礎培養基中,加入終濃度為2%的胎牛血清、100UmL的青霉素-鏈霉素、0.1%的ITS-X和50ngmL的KGF;所述的培養基S3的組成包括:DMEM基礎培養基中,加入終濃度為1%的無血清添加劑、100UmL的青霉素-鏈霉素、2μM的視黃酸、0.1μM的BMPI型受體抑制劑LDN193189、0.25μM的E-N-4-芐基-1-哌嗪基-1-3,5-二甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基甲亞胺和100nM的PORCN抑制劑Wnt-C59。
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