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龍圖騰網(wǎng)獲悉綿陽(yáng)師范學(xué)院申請(qǐng)的專利高純度豬圓環(huán)病毒4型Cap蛋白的制備方法獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN115477694B 。

龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-22發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202210596791.3，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C07K14/01；該發(fā)明授權(quán)高純度豬圓環(huán)病毒4型Cap蛋白的制備方法是由陳希文;伍春平;尹苗;易浩楠;吳倩;趙洪設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2022-05-30向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本高純度豬圓環(huán)病毒4型Cap蛋白的制備方法在說(shuō)明書(shū)摘要公布了：本發(fā)明涉及Cap38～228蛋白制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及高純度豬圓環(huán)病毒4型Cap蛋白的制備方法。步驟包括S1.基于PCV4Cap蛋白和His?SUMO標(biāo)簽的核苷酸序列，構(gòu)建帶雙標(biāo)簽的原核表達(dá)載體pET?28a?His?SUMO?Cap38～228；S2.以pET?28a?His?SUMO?Cap38～228轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞BL21，以IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，并對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，制備出目的蛋白His?SUMO?Cap38～228；同時(shí)經(jīng)Ni?NTA親和層析柱對(duì)目的蛋白His?SUMO?Cap38～228純化；S3.His?SUMO?Cap38～228經(jīng)SUMO蛋白酶酶切后，再次用Ni?NTA親和層析柱去除His?SUMO標(biāo)簽，獲得Cap38～228。本發(fā)明可有效制備出高純度的PCV4Cap38～228蛋白，其純度大于95％，為血清學(xué)診斷、Cap蛋白的多抗或單抗以及亞單位疫苗研發(fā)提供了PCV4Cap38～228蛋白制備的技術(shù)基礎(chǔ)。

本發(fā)明授權(quán)高純度豬圓環(huán)病毒4型Cap蛋白的制備方法在權(quán)利要求書(shū)中公布了：1.高純度豬圓環(huán)病毒4型Cap38~228蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： S1.基于PCV4Cap蛋白和His-SUMO標(biāo)簽的核苷酸序列，構(gòu)建帶雙標(biāo)簽的原核表達(dá)載體pET-28a-His-SUMO-Cap38~228； 主要包括： 以PCV4GX2020FCG49毒株Cap蛋白核苷酸序列為基礎(chǔ)，進(jìn)行大腸桿菌密碼子偏好性優(yōu)化； 在Cap蛋白核苷酸的N端加入His-SUMO標(biāo)簽的核苷酸序列構(gòu)建His-SUMO-Cap38~228目標(biāo)序列； 在His-SUMO-Cap38~228目標(biāo)序列的N端加入RBS序列及翻譯起始信號(hào)，同時(shí)，在該序列5’和3’端分別加入XbaI和HindⅢ酶切位點(diǎn)； 將所述目標(biāo)序列和pET-28a載體質(zhì)粒分別經(jīng)XbaI和HindⅢ雙酶切后，進(jìn)行膠回收雙酶切產(chǎn)物，并使用T4DNA連接酶于16℃條件下連接過(guò)夜，制備出連接產(chǎn)物； 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，挑取單克隆菌落擴(kuò)大培養(yǎng)，并利用質(zhì)粒提取試劑盒提取重組質(zhì)粒pET-28a-His-SUMO-Cap38~228，用XbaI和HindⅢ進(jìn)行雙酶切鑒定，并測(cè)序鑒定目標(biāo)序列的正確插入，最終構(gòu)建獲得pET-28a-His-SUMO-Cap38~228表達(dá)載體； S2.以pET-28a-His-SUMO-Cap38~228轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞BL21，以IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，并對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，制備出目的蛋白His-SUMO-Cap38~228；同時(shí)經(jīng)Ni-NTA親和層析柱對(duì)目的蛋白His-SUMO-Cap38~228純化； 其中，對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，包括：設(shè)置誘導(dǎo)時(shí)間為10h；設(shè)置誘導(dǎo)溫度為20℃-30℃；設(shè)置IPTG濃度為0.2mmolL； S3.His-SUMO-Cap38~228經(jīng)SUMO蛋白酶酶切后，再次用Ni-NTA親和層析柱去除His-SUMO標(biāo)簽，獲得Cap38~228。

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