東莞市東南部中心醫院陳章權獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉東莞市東南部中心醫院申請的專利一種基于鎖環探針的熒光定量PCR檢測基因突變位點的試劑盒及檢測方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115927573B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-12發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202310019274.4,技術領域涉及:C12Q1/6876;該發明授權一種基于鎖環探針的熒光定量PCR檢測基因突變位點的試劑盒及檢測方法是由陳章權;佃東春;余路新;孫元中;鄧玉玲;湯子彬;何素輝;張偉龍;鐘陽青;許瑤設計研發完成,并于2023-01-06向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種基于鎖環探針的熒光定量PCR檢測基因突變位點的試劑盒及檢測方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種基于鎖環探針的熒光定量PCR檢測基因突變位點的試劑盒及檢測方法。本發明將RCA技術中的鎖環探針連接技術與實時熒光定量PCR技術相結合,利用鎖環探針連接特性檢測點突變,利用qPCR技術實現信號擴增放大,靈敏度高、特異性好,已對SARS?cov2?Delta突變株的T478K突變位點、地貧的CD17突變位點和結核桿菌利福平耐藥株rpoB基因531突變位點實現檢測;其中SARS?cov2的最低檢測限可達54.9fM,地貧和結核耐藥的檢測限分別為95.35zM、55.12aM。該方法還可廣泛應用于其他的疾病相關的基因突變位點的檢測。
本發明授權一種基于鎖環探針的熒光定量PCR檢測基因突變位點的試劑盒及檢測方法在權利要求書中公布了:1.padlock探針和引物在制備檢測SARS-cov2-Delta株T478K突變位點的試劑盒中的用途,其特征在于,所述padlock探針的序列如下所示: PadlockT478K:5’pTGCTACCGGCCTGATAGATTTCAGTTGAGTGGAACCGAGGAAATAGAGAACCCCATCCAGCACTTCCCtatgTCTCTCCCACATCGTTTCTTTCAACACCATTACAAGGTT-3’; 所述引物,包括上游引物和下游引物: 所述上游引物序列:5’-CCATCCAGCACTTCCCTATGTCT-3’; 所述下游引物序列:5’-GGTTCTCTATTTCCTCGGTTCCAC-3’; 所述試劑盒中包含TaqMan探針; 所述TaqMan探針的序列為:5’-CTCCCACATCGTTTCT-3’; 所述用途包含以下步驟:S1:探針的連接:將padlock探針和待檢測的目標DNA進行雜交,在連接酶的作用下連接成環;S2:探針的擴增,采用引物對步驟S1中生成的連接產物進行熒光定量PCR擴增; 所述步驟S1的反應體系包括:1~100nM鎖環探針0.5~1.5μL、1aM~100nMDNA模板0.5~1.5μL、3~5UTaqDNALigase1~3μL、0.5~1.5μL連接反應緩沖液和DEPC處理水,補充水至10μL。
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