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龍圖騰網獲悉上海宏序生物科技有限公司申請的專利一種5’瓣狀核酸酶介導的等溫擴增方法獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN116064745B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-12發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202210813606.1，技術領域涉及：C12Q1/6848；該發明授權一種5’瓣狀核酸酶介導的等溫擴增方法是由李靜;張璐璐;查洋;陳銀薩;蔣廣志;陳金薩設計研發完成，并于2022-07-12向國家知識產權局提交的專利申請。

本一種5’瓣狀核酸酶介導的等溫擴增方法在說明書摘要公布了：本發明是一種等溫擴增方法，利用Taq酶的5’瓣狀核酸內切酶的特性，釋放出互補配對的適配子；適配子之間互補擴增補齊缺口；全長適配子解鏈后的單鏈可識別體系中環裝質粒目的區域，在等溫擴增酶的作用下進行等溫擴增；本方法包括引物組、適配子序列、探針序列、外源環狀質粒；所用酶包括taq酶、Bst酶等，本發明優點在于：減少引物對，降低設計難度；2.特異性高，假陽性率低；3.設計簡單，可規模化檢測；方便拓展應用范疇。

本發明授權一種5’瓣狀核酸酶介導的等溫擴增方法在權利要求書中公布了：1.一種5’瓣狀核酸酶介導的等溫擴增方法，利用Taq酶的5’瓣狀核酸內切酶的特性，釋放出互補配對的適配子；適配子之間互補擴增補齊缺口；全長適配子解鏈后的單鏈可識別體系中環裝質粒目的區域，在等溫擴增酶的作用下進行等溫擴增；具體步驟如下： 步驟A：設計引物集合： a.針對目的基因設計引物，引物包含兩對，分別為AB和CD； b.所述的AB為外側雙向引物，引物長度為10-60nt，AB引物序列與外源質粒無識別區域；擴增子長度無限定； c.所述的CD為內側雙向引物，CD引物5’端分別為探針PCPD序列；3’端為目的基因錨定引物C’和D’；CD引物為大于等于1對； 所述的C’D’3’端1-5個堿基與目的基因不同，達到阻斷延伸的作用； 所述的探針PC包括兩部分序列，外源質粒識別序列C1和適配子序列1； 所述的探針PD包括兩部分序列，外源質粒識別序列D1和適配子序列2； 所述的C1和D1為外源質粒識別序列，識別外源質粒特異性序列，外源質粒識別序列長度為10-60nt； 適配子序列1和適配子序列2為反向互補序列，其序列在目的基因及外源質粒上沒有識別區域，序列長度為10-60nt； d.外源質粒選擇：選擇適合的環狀質粒作為外源質粒，用于等溫擴增 步驟B目的基因識別及探針置換、延伸，形成外源質粒識別結構 a.獲得需要檢測的樣本DNARNA用于后續檢測； b.AB引物對識別目的基因位點，并結合在目的基因上，在taq酶的作用下開始擴增，所述的taq酶為具有5’瓣狀核酸內切酶活性的DNA聚合酶； c.CD引物對的3’端C’、D’序列分別識別目的基因位點，CD引物的PCPD序列分別被切割并釋放出來； 所述的CD識別區域位于AB引物對的擴增范圍內，且CD識別區域的5'側序列與靶序列特異性結合； d.PCPD序列3’端互補，在taq酶作用下延伸補平，形成雙鏈DNA結構PCPD； 步驟C探針識別及等溫擴增 a.雙鏈DNA結構PCPD雙鏈變性恢復單鏈PCPD； b.PCPD分別退火識別并結合外源環狀質粒特異性位點； c.滾環擴增； d.鑒定擴增結果。

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