青島大學李寧獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉青島大學申請的專利一種非酒精性脂肪肝動物模型的構建方法獲國家發(fā)明授權專利權,本發(fā)明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN117256563B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-15發(fā)布的發(fā)明授權授權公告中獲悉:該發(fā)明授權的專利申請?zhí)?專利號為:202310418895.X,技術領域涉及:C12N15/85;該發(fā)明授權一種非酒精性脂肪肝動物模型的構建方法是由李寧;劉順龍;叢琬芯;鞏遵雙;王彬設計研發(fā)完成,并于2023-04-19向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種非酒精性脂肪肝動物模型的構建方法在說明書摘要公布了:本發(fā)明公開了一種非酒精性脂肪肝動物模型的構建方法,屬于模型構建技術領域。本發(fā)明采用將動物肝臟的Eva1a基因特異敲除法建立非酒精性脂肪肝動物模型。本發(fā)明以Cre?loxp技術作為示例建立非酒精性脂肪肝動物模型,構建得到的非酒精性脂肪肝動物模型,伴有脂肪肝、血脂異常等特征,與臨床病理相似度高,且不區(qū)分雌性和雄性,都有顯著脂肪肝表型。本發(fā)明所述非酒精性脂肪肝動物模型,無需高脂飼料喂養(yǎng),成本低,效率高,可通過遺傳的方式批量繁殖生產,鼠齡到10周即出現(xiàn)脂肪肝表型,能夠有效縮短非酒精性脂肪肝動物模型的建立周期,極大節(jié)約NAFLD的醫(yī)學研究的時間成本。
本發(fā)明授權一種非酒精性脂肪肝動物模型的構建方法在權利要求書中公布了:1.一種利用Cre-loxP方法構建非酒精性脂肪肝動物模型的方法,其特征在于,包括以下步驟:1以構建得到的Eva1afloxflox動物和攜帶Cre工具動物為親本進行雜交,獲得F1代;所述工具動物中攜帶的Cre利用在肝臟特異性表達的Alb啟動子啟動表達; 2篩選F1代中基因型為Eva1aflox+-Cre+動物與所述Eva1afloxflox動物雜交,獲得F2代; 3篩選F2代中基因型為Eva1aflox++Cre+的動物,得所述非酒精性脂肪肝動物模型;所述篩選包括通過gt3、gt5和Cre基因的引物對進行PCR法鑒定; 利用gt3的引物對進行PCR,出現(xiàn)單一條帶; 利用gt5的引物對進行PCR,只有一條帶鑒定為Eva1aflox++純合子;若出現(xiàn)兩條帶,為Eva1aflox+-雜合子; 利用Cre的引物對進行PCR,出現(xiàn)條帶鑒定為Cre+; 針對gt3設計的引物對包括核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的gt3-F和核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的gt3-R; 針對gt5設計的引物對包括核苷酸序列如SEQIDNo.3所示的gt5-F和核苷酸序列如SEQIDNo.4所示的gt5-R; 針對Cre設計的引物對包括核苷酸序列如SEQIDNo.5所示的Cre-F和核苷酸序列如SEQIDNo.6所示的Cre-R。
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