蘇州科技大學谷雨獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉蘇州科技大學申請的專利發光RNA適配體結合放大與轉錄系統及DNA甲基化酶活性檢測方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116287150B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-15發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202211102140.0,技術領域涉及:C12Q1/6858;該發明授權發光RNA適配體結合放大與轉錄系統及DNA甲基化酶活性檢測方法是由谷雨;邱星辰;范存霞;黃梓涵;郭春顯設計研發完成,并于2022-09-09向國家知識產權局提交的專利申請。
本發光RNA適配體結合放大與轉錄系統及DNA甲基化酶活性檢測方法在說明書摘要公布了:本發明涉及一種發光RNA適配體結合放大與轉錄系統及DNA甲基化酶活性檢測方法,利用了RNA熒光適配體的低背景和高熒光效率,開發了一種無標記和超靈敏的傳感方法。通過級聯滾轉環狀擴增和RNA轉錄的雙重放大過程,有效地將待測信號轉化為RNA熒光適配體?無機染料復合物的熒光信號,最終實現DNA甲基化酶的定量檢測,線性范圍為0.02~100UmL,檢測限低至為0.0016UmL。這種基于RNA熒光適應體的檢測策略,為復雜系統中微量物質的定量提供了一種實用的方法。
本發明授權發光RNA適配體結合放大與轉錄系統及DNA甲基化酶活性檢測方法在權利要求書中公布了:1.一種發光RNA適配體結合放大與轉錄系統在制備DNA甲基化酶活性檢測產品中的應用,其特征在于,所述發光RNA適配體結合放大與轉錄系統的構建包括以下步驟: S1、將第一引物與第二引物共孵育;所述第一引物上包括相連的第一序列和第二序列,所述第一序列與第二引物互補; S2、向得到的體系中加入環形鎖掛探針進行滾環擴增,形成單鏈DNA;所述環形鎖掛探針的部分序列與第二序列互補;所述環形鎖掛探針的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示; S3、向步驟S2擴增完成的體系中加入第三引物,所述第三引物以滾環擴增得到的單鏈DNA為模板形成DNA雙鏈; S4、將步驟S3得到的DNA雙鏈進行體外轉錄,向轉錄后的體系中加入染料,得到所述發光RNA適配體結合放大與轉錄系統; 使用所述發光RNA適配體結合放大與轉錄系統進行DNA甲基化酶活性檢測的步驟包括: 在步驟S1與步驟S2之間增加以下步驟:向步驟S1的體系中加入待測DNA甲基化酶進行孵育,隨后加入限制性內切酶進行孵育;所述限制性內切酶特異性切割未被所述DNA甲基化酶甲基化的引物復合物,且無法切割被所述DNA甲基化酶甲基化的引物復合物; 步驟S4中,加入染料后根據熒光強度檢測所述待測DNA甲基化酶的活性; 所述第一引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示,所述第二引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示,所述第三引物的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。
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