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龍圖騰網(wǎng)獲悉中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學第三附屬醫(yī)院申請的專利血液樣本中GPC-3復合物的富集、檢測方法及應用獲國家發(fā)明授權專利權，本發(fā)明授權專利權由國家知識產(chǎn)權局授予，授權公告號為：CN114813266B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權局官網(wǎng)在2025-08-22發(fā)布的發(fā)明授權授權公告中獲悉：該發(fā)明授權的專利申請?zhí)?專利號為：202210251108.2，技術領域涉及：G01N1/28；該發(fā)明授權血液樣本中GPC-3復合物的富集、檢測方法及應用是由王紅陽;文文;陳淑楨;辛鑫設計研發(fā)完成，并于2022-03-15向國家知識產(chǎn)權局提交的專利申請。

本血液樣本中GPC-3復合物的富集、檢測方法及應用在說明書摘要公布了：本發(fā)明提供了血液樣本中GPC?3復合物的富集、檢測方法及應用。富集方法包括A、采集肝癌患者外周血置于抗凝管中并混勻全血；B、加入多倍體積的紅細胞裂解液，吹打混勻，冰上裂解后，離心棄紅色上清，若細胞沉淀仍有紅色，重復該步驟；C、洗滌沉淀1?2次，加入PBS或生理鹽水重懸沉淀，離心棄上清；D、白細胞計數(shù)，加PBS重懸細胞沉淀，取適量充池，靜置2?3分鐘，通過低倍鏡四角4個大方格手工白細胞計數(shù)，計算公式如下：WBCL＝N4*105*104，并計算每毫升原懸液中的白細胞數(shù)量，WBCml原懸液＝N4*104*稀釋倍數(shù)；E、獲取的細胞加入含1％蛋白酶抑制劑和1％磷酸酶抑制劑的裂解液，冷藏靜置一定時間后，離心獲取上清液作為待檢測樣本，實現(xiàn)GPC?3富集。

本發(fā)明授權血液樣本中GPC-3復合物的富集、檢測方法及應用在權利要求書中公布了：1.一種血液樣本中GPC-3復合物的富集方法，其特征在于，包含如下步驟： A、血樣采集 采集肝癌患者外周血置于抗凝管中，并混勻全血； B、紅細胞裂解 加入多倍體積的紅細胞裂解液，吹打混勻，冰上裂解一定時間后，離心棄紅色上清，若細胞沉淀仍有紅色，重復該步驟； C、沉淀除雜 洗滌沉淀1-2次，加入PBS或生理鹽水重懸沉淀，離心棄上清； D、白細胞計數(shù) 加PBS重懸細胞沉淀，取適量充池，靜置2-3分鐘，通過低倍鏡四角4個大方格手工白細胞計數(shù)，計算公式如下：WBCL＝N4*105*104，并計算每毫升原懸液中的白細胞數(shù)量， WBCml原懸液＝N4*104*稀釋倍數(shù)，當白細胞數(shù)量不低于107時，進入后續(xù)步驟； E、GPC-3復合物的富集 抗體純化分離獲取目的CTC細胞，對獲取的細胞進行細胞計數(shù)并記錄數(shù)據(jù)，獲取的細胞加入含1％蛋白酶抑制劑和1％磷酸酶抑制劑的裂解液，所述裂解液包括RIPA裂解液或NP-40裂解液，所述RIPA裂解液的主要成分為：Tris鹽緩沖體系內(nèi)的TritonX-100和SDS；所述NP-40裂解液的主要成分為：Tris鹽緩沖液體系下的NP-40和脫氧膽酸鈉溶液；冷藏靜置一定時間后，離心獲取上清液作為待檢測樣本。

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