中國煙草總公司鄭州煙草研究院;鄭州大學陳雪梅獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉中國煙草總公司鄭州煙草研究院;鄭州大學申請的專利一種用于評價煙草煙氣誘發炎癥反應程度的體外細胞共培養模型的構建方法、評價方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN109207421B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-26發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:201810982996.9,技術領域涉及:C12N5/071;該發明授權一種用于評價煙草煙氣誘發炎癥反應程度的體外細胞共培養模型的構建方法、評價方法是由陳雪梅;李翔;謝復煒;劉惠民;華辰鳳;李玉萍;田霄翌;賈培君;邢寅霈;喬梁峻;康彧設計研發完成,并于2018-08-27向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種用于評價煙草煙氣誘發炎癥反應程度的體外細胞共培養模型的構建方法、評價方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種用于評價煙草煙氣誘發炎癥反應程度的體外細胞共培養模型的構建方法、評價方法,屬于煙草及卷煙煙氣安全性評價技術領域。本發明通過對beas?2b細胞在共培養板的上室實現氣液界面的培養,然后進行染毒處理,將人肺巨噬細胞用CFDASE活細胞染料進行染色,染毒處理的beas?2b細胞和染色處理的人肺巨噬細胞分別置于共培養板的上下室進行共培養,利用熒光顯微鏡觀察和計數,評價巨噬細胞遷移的情況,再分別測定上、下室培養基檢測炎癥因子的表達,評價共培養體系的炎癥變化,從而評價煙草煙氣誘發炎癥反應的程度。
本發明授權一種用于評價煙草煙氣誘發炎癥反應程度的體外細胞共培養模型的構建方法、評價方法在權利要求書中公布了:1.一種用于非診斷目的的評價煙草煙氣誘發炎癥反應程度的方法,其特征在于:包括以下步驟: 1)將beas-2b細胞置于共培養板的上室中培養,然后進行染毒處理,染毒處理的操作為: A、收集待測煙的煙氣冷凝物,于溶媒中充分溶解,得到染毒母液; B、將染毒母液加入beas-2b細胞的培養基中,得到染毒液; C、將稀釋至300μgmL的染毒液染毒液加入共培養板的上室中,對beas-2b細胞進行染毒; 2)將用CFDA-SE活細胞染料染色后的人肺巨噬細胞置于共培養板的下室中,與步驟1)中染毒處理的beas-2b細胞進行共培養,共培養的時間為0.5~10h; 3)從細胞水平和蛋白表達水平方面選取評價指標,劃分評價等級標準,所述從細胞水平選取評價指標具體為細胞數目的測定,所述細胞數目測定為beas-2b染毒后共培養下室巨噬細胞游走至上室的熒光及進入上室的巨噬細胞數量測定,所述從蛋白表達水平選取評價指標具體為IL-6炎癥因子的表達量的測定; 4)評價煙草煙氣誘發炎癥反應的程度; 步驟1)中beas-2b細胞置于共培養板的上室中培養所用的培養基包括BEBM基礎培養基和細胞因子;所述的細胞因子包括BPE、Hydrocortisone、hEGF、Epinephrine、Insulin、Transferrin、Triiodothyronine、RetinoicAcid、GA中的至少一種; 步驟2)中人肺巨噬細胞的培養基為DMEM高糖復合培養基; 共培養體系為transwell共培養系統,共培養系統的膜孔徑大小為5~8μm;對beas-2b細胞進行氣液界面培養。
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