青海互助天佑德青稞酒股份有限公司;中國食品發酵工業研究院有限公司黃和強獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉青海互助天佑德青稞酒股份有限公司;中國食品發酵工業研究院有限公司申請的專利評價酒體中不同微量成分對細胞自噬水平影響程度的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116203002B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-08發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202310098248.5,技術領域涉及:G01N21/64;該發明授權評價酒體中不同微量成分對細胞自噬水平影響程度的方法是由黃和強;陳杉彬;李善文;韓興林;王德良;馮聲寶;趙文梅設計研發完成,并于2023-02-10向國家知識產權局提交的專利申請。
本評價酒體中不同微量成分對細胞自噬水平影響程度的方法在說明書摘要公布了:本申請用于食品領域,公開了一種評價酒體微量成分對細胞自噬水平影響程度的方法,包括以下步驟:步驟一、配制穩定表達GFP?RFP?LC3蛋白的人肝細胞LO2單細胞懸液;步驟二、將1.5×104cellmL的該LO2細胞接種于6孔板中蓋玻片培養24h至貼壁;步驟三、加入2mL含80μL純酒精或含不同酒體微量成分酒樣的細胞培養,37℃,5%CO2條件培養24h。步驟四、4%多聚甲醛中固定15min。步驟五、PBS清洗玻片晾干后滴加含DAPI的防淬滅劑,爬滿細胞的一面置于防淬滅劑上。步驟六、激光共聚焦顯微鏡觀察紅綠熒光,根據不同熒光判斷酒體微量成分對細胞自噬的影響。本申請通過上述觀察不同熒光能夠快速評價酒體中微量成分對細胞自噬水平的影響程度。
本發明授權評價酒體中不同微量成分對細胞自噬水平影響程度的方法在權利要求書中公布了:1.一種評價酒體中不同微量成分對細胞自噬水平影響程度的方法,其特征在于,包括以下步驟: 步驟一、將對數生長期穩定表達GFP-RFP-LC3蛋白的人肝細胞L02用胰蛋白酶消化,配制成單細胞懸液; 步驟二、在6孔板中每個孔均勻放置3個蓋玻片,在6孔板孔中先加少量培養液,使玻片緊密貼合,按1.5×104cellmL的密度將穩定表達GFP-RFP-LC3的L02細胞接種于6孔板中,每孔1mL,蓋上6孔板后置于在37℃,5%CO2條件下進行培養24h至細胞貼壁; 步驟三、移去培養液,用PBS清洗2遍,之后貼壁加入2mL細胞培養混合液,其中包含80μL樣品,在37℃,5%CO2條件下進行培養24h; 步驟四、移去上清液,用PBS清洗2遍,然后在4%多聚甲醛中固定15min; 步驟五、用PBS清洗2遍,用鑷子將玻片夾起,將玻片置于濾紙上晾干,并在載玻片上滴加含DAPI的防淬滅劑,將爬滿細胞的一面置于防淬滅劑上; 步驟六、使用激光共聚焦顯微鏡觀察熒光; GFP-RFP-LC3蛋白的氨基酸序列為SEQIDNO.1;穩定表達GFP-RFP-LC3蛋白的人肝細胞L02的制備方法包括:克隆或合成GFP、RFP、LC3基因,組裝GFP-RFP-LC3質粒;將GFP-RFP-LC3質粒與pMD2G和PSApX2包裝質粒共轉染至293T細胞,制備攜帶GFP-RFP-LC3基因的慢病毒;使用慢病毒感染肝組織細胞。
如需購買、轉讓、實施、許可或投資類似專利技術,可聯系本專利的申請人或專利權人青海互助天佑德青稞酒股份有限公司;中國食品發酵工業研究院有限公司,其通訊地址為:810500 青海省海東市互助縣威遠鎮西大街6號;或者聯系龍圖騰網官方客服,聯系龍圖騰網可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網”。
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