深圳小洲生態環境有限公司伍娥獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉深圳小洲生態環境有限公司申請的專利一種古樹名木中炭疽菌的快速檢測方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115558699B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-08發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202110747665.9,技術領域涉及:C12Q1/04;該發明授權一種古樹名木中炭疽菌的快速檢測方法是由伍娥;昝欣;丁明艷;胡長云;周德立;陳朝超;伍洲洲設計研發完成,并于2021-07-01向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種古樹名木中炭疽菌的快速檢測方法在說明書摘要公布了:本發明旨在解決古樹名木中炭疽菌檢測效率低、檢測結果不準確、檢測成本高昂、操作繁瑣費時等問題,提供了一種古樹名木中炭疽菌的快速檢測方法,通過快速有效的體外培養炭疽菌,大大提高了炭疽菌侵染初期時的檢出率;通過設計專門的培養基、振蕩培養、兩次增菌處理、超聲波處理、酸化處理、藍光照射處理等手段,極大的提高了古樹名木中炭疽菌的體外培養效率,并通過最后的剛果紅染色,準確有效地檢測出炭疽菌。
本發明授權一種古樹名木中炭疽菌的快速檢測方法在權利要求書中公布了:1.一種古樹名木中炭疽菌的快速檢測方法,其特征在于:包括以下步驟: 1、配置專用培養基:取去皮馬鈴薯250g,粉碎后,加入蒸餾水1000ml、葡萄糖35g、木屑50g、麥皮20g、瓊脂30g、碳酸鈣10g,調整pH至7.5,于121℃滅菌30min,冷卻至常溫備用; 2、振蕩培養:取古樹名木發生異常的兩片葉子,粉碎處理后,置于含有1L上述專用培養基的培養瓶中,500rpm條件下振蕩培養6h,培養溫度為38℃; 3、首次增菌:向培養瓶中加入增菌營養劑100ml,在30℃條件下培養2h,所采用的增菌營養劑配方為:按重量份計,18%蛋白胨、5%菊芋粉、1%低聚己糖、1%丙酮酸鈉、0.5%鹽酸吡哆醇、1.2%枸櫞酸鐵銨、1.5%氯化鉀,其余為蒸餾水;增菌營養劑使用前121℃滅菌30min; 4、超聲波處理:采用頻率為10KHz的超聲波對培養混合物進行處理,處理時間為3min; 5、酸化處理:向培養瓶中的培養混合物中加入醋酸10ml,搖勻后,靜置培養1h; 6、二次增菌:向培養瓶中加入增菌營養劑60ml,在33℃條件下培養2h,所采用的增菌營養劑配方為:按重量份計,12%酵母粉、3%菊芋粉、1%亞硒酸鈉、0.1%乙酰膽堿、1.5%氯化鋰、0.5%磷酸氫二鈉,其余為蒸餾水;增菌營養劑使用前121℃滅菌30min; 7、藍光照射:用藍光燈照射培養混合物20min,所采用藍光燈的波長為400~450nm,光照強度為800~900lx; 8、黑暗處理:藍光照射后,將培養瓶置于完全黑暗條件下靜置20min; 9、pH調整:將黑暗處理后的培養瓶取出,用質量分數為10%的鹽酸溶液調整其pH到7.5; 10、染色:吸取少量的培養混合物,置于潔凈的培養皿中,在培養皿下方通過微火3-4次,使培養皿中的水分蒸干,冷卻后,在培養皿中滴加適量的剛果紅染色劑,常溫避光放置30min,然后倒掉染液,用蒸餾水多次輕輕清洗培養皿,至水中無染液的顏色為止;用吸水紙吸取多余水分,顯微觀察培養皿,如果出現了透明圈,則斷定古樹名木感染了炭疽菌。
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