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龍圖騰網(wǎng)獲悉江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所申請(qǐng)的專(zhuān)利一種懸鉤子屬種間雜交種質(zhì)的鑒定方法及鑒定用引物獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN115852030B 。

龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-12發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?專(zhuān)利號(hào)為：202211424935.3，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12Q1/6895；該發(fā)明授權(quán)一種懸鉤子屬種間雜交種質(zhì)的鑒定方法及鑒定用引物是由張春紅;吳文龍;吳雅瓊;閭連飛;黃正金;王小敏;楊海燕設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2022-11-15向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專(zhuān)利申請(qǐng)。

本一種懸鉤子屬種間雜交種質(zhì)的鑒定方法及鑒定用引物在說(shuō)明書(shū)摘要公布了：本發(fā)明公開(kāi)了一種懸鉤子種間雜交種質(zhì)的鑒定方法，包括以下步驟：以六倍體栽培黑莓為母本，以二倍體野生懸鉤子為父本，獲取雜交種子，培育獲得種間雜交苗；設(shè)計(jì)父本SSR引物，對(duì)種間雜交苗DNA進(jìn)行擴(kuò)增，篩選引物組合鑒別出真雜交種；將篩選出的SSR引物對(duì)在野生懸鉤子、樹(shù)莓、黑莓品種中進(jìn)行擴(kuò)增條帶驗(yàn)證，優(yōu)選出鑒別不同野生懸鉤子父本雜交后代的特異引物。用篩選出的SSR引物對(duì)黑莓栽培品種和懸鉤子種間雜交苗進(jìn)行鑒定，根據(jù)擴(kuò)增條帶鑒別真雜交種和確認(rèn)親本種質(zhì)來(lái)源。本發(fā)明首次實(shí)現(xiàn)將二倍體野生懸鉤子與六倍體栽培黑莓品種雜交成功，利用篩選獲得的SSR分子標(biāo)記進(jìn)行雜交種鑒別，并驗(yàn)證了野生種質(zhì)通過(guò)雜交進(jìn)入栽培品種。

本發(fā)明授權(quán)一種懸鉤子屬種間雜交種質(zhì)的鑒定方法及鑒定用引物在權(quán)利要求書(shū)中公布了：1.一種懸鉤子種間雜交種質(zhì)的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟： （1）獲取雜交種子：以六倍體栽培黑莓為母本，以二倍體野生懸鉤子為父本，進(jìn)行人工雜交后獲得種子；將種子進(jìn)行培育獲得種間雜交苗木；所述六倍體栽培黑莓選自黑莓品種‘雙季黑莓’，二倍體野生懸鉤子選自‘蓬蘽’； （2）引物設(shè)計(jì)：采集父本幼嫩葉片進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，設(shè)計(jì)若干對(duì)SSR引物； （3）引物篩選：將步驟（2）設(shè)計(jì)的SSR引物對(duì)步驟（1）中所有獲得的種間雜交苗木進(jìn)行驗(yàn)證篩選，利用在雙親中擴(kuò)增的帶型鑒別出雜交成功的真雜交種質(zhì)，并篩選出能夠鑒別出真雜交種的特異SSR引物；篩選出的特異SSR引物為Rh-11、Rh-20、Rh-21、Rh-34，Rh-11正向引物為5’-CGGTGCCTCTCTCTCTCTCT-3’,Rh-11反向引物為5’-CGGAACCAAACCCATCATCG-3’；Rh-20正向引物為5’-AAAGACCCAGCTATGTGCCC-3’,Rh-20反向引物為5’-GCTTTTGCACAAAGAGGAAGA-3’；Rh-21正向引物為5’-AATCCAGCTCATGTGCCTCA-3’，Rh-21反向引物為5’-TCTGTCGGACTGCAGACAAC-3’；Rh-34正向引物為5’-CTCTCTCCTCTGCCCCTCTT-3’，Rh-34反向引物為5’-CTCTTATCCTCGCCGTCGAC-3’； （4）擴(kuò)增驗(yàn)證：將步驟（2）設(shè)計(jì)的SSR引物對(duì)步驟（1）中所有獲得的種間雜交苗木進(jìn)行驗(yàn)證篩選，從中篩選出的僅在父本中有擴(kuò)增條帶且在母本中沒(méi)有條帶的特異SSR引物，進(jìn)一步在其他野生懸鉤子、樹(shù)莓、黑莓品種中進(jìn)行擴(kuò)增比較驗(yàn)證，進(jìn)一步確認(rèn)能夠特異識(shí)別來(lái)自不同野生懸鉤子親本的雜交種質(zhì)的引物；進(jìn)一步篩選出的SSR引物為Rh-2、Rh-3、Rh-4、Rh-16，Rh-2正向引物為5’-AAGCGCGACAACGAAAAGAC-3’,Rh-2反向引物為5’-ACAAGTAAAGCATGCAACAGGT-3’；Rh-3正向引物為5’-TGGCACACAGTCACACAGAT-3’,Rh-3反向引物為5’-TCTGCCTCTGGTTTCCTTTCC-3’；Rh-4正向引物為5’-CTCACACCCGTCTGCTTCAT-3’，Rh-4反向引物為5’-ATTTCTGTGGTGCTCTCGCA-3’；Rh-16正向引物為5’-ACACAAACGACTTGGCTTGTG-3’,Rh-16反向引物為5’-GACTCTTGGCCCTAGTGCTG-3’； （5）雜交種質(zhì)鑒定：將步驟（4）中進(jìn)一步篩選出的SSR引物對(duì)種間雜交幼苗進(jìn)行分子標(biāo)記鑒定，能夠擴(kuò)增出條帶的即為真雜交種。

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