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龍圖騰網(wǎng)獲悉武漢科技大學(xué)申請(qǐng)的專利大隊(duì)列樣本單細(xì)胞富集和混樣建庫(kù)測(cè)序方法獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN114891856B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-15發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202210530632.3，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12Q1/6806；該發(fā)明授權(quán)大隊(duì)列樣本單細(xì)胞富集和混樣建庫(kù)測(cè)序方法是由周經(jīng)姣;楊程;王仲怡;王毅;周俊;王玉蝶;晏晴設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2022-05-16向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本大隊(duì)列樣本單細(xì)胞富集和混樣建庫(kù)測(cè)序方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開一種大隊(duì)列樣品單細(xì)胞富集和混樣建庫(kù)測(cè)序方法，包括如下步驟：S1、形成多來源的單細(xì)胞樣品；S2、對(duì)不同來源的單細(xì)胞樣品分別進(jìn)行生物素抗體孵育、鏈霉親和素偶聯(lián)寡核苷酸標(biāo)記，然后多樣品混合形成混合樣品；S3、制備3’轉(zhuǎn)錄組cDNA樣品和標(biāo)記DNA樣品；S4、構(gòu)建3’轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)；S5、構(gòu)建標(biāo)記DNA文庫(kù)；S6、將3’轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)和標(biāo)記DNA文庫(kù)合并進(jìn)行測(cè)序分析。本發(fā)明提供的單細(xì)胞富集、鏈霉親和素偶聯(lián)寡核苷酸標(biāo)記樣品、單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組混樣建庫(kù)測(cè)序及分析的技術(shù)方法，適用于感染性疾病、炎癥、腫瘤等大隊(duì)列樣本研究和稀有細(xì)胞群體研究。

本發(fā)明授權(quán)大隊(duì)列樣本單細(xì)胞富集和混樣建庫(kù)測(cè)序方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種大隊(duì)列樣品單細(xì)胞富集和混樣建庫(kù)測(cè)序方法，其特征在于，包括如下步驟： S1、自不同來源的血液或骨髓或瘤體組織樣本中分離富集目的細(xì)胞，形成單細(xì)胞樣品； S2、對(duì)步驟S1獲得的多樣本來源的單細(xì)胞樣品進(jìn)行生物素抗體孵育，并通過鏈霉親和素偶聯(lián)寡核苷酸標(biāo)記各樣品，然后將不同來源的樣品混合形成混合樣品； S3、將混合樣品放入ChromiumController中獲得GEMs，再對(duì)GEMs進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得DNA溶液，然后在得到的DNA產(chǎn)物中加入PCRmix、轉(zhuǎn)錄組cDNA引物和標(biāo)記DNA引物進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，并通過瓊脂糖凝膠電泳分離回收標(biāo)記DNA樣品和3’轉(zhuǎn)錄組cDNA樣品； S4、利用3’轉(zhuǎn)錄組cDNA樣品進(jìn)行接頭連接和文庫(kù)測(cè)序索引PCR反應(yīng)，構(gòu)建3’轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)； S5、利用標(biāo)記DNA樣品進(jìn)行文庫(kù)測(cè)序索引PCR反應(yīng)，構(gòu)建標(biāo)記DNA文庫(kù)； S6、按照測(cè)序平臺(tái)的要求對(duì)3’轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)和標(biāo)記DNA文庫(kù)進(jìn)行變性和稀釋，并對(duì)3’轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)和標(biāo)記DNA文庫(kù)合并進(jìn)行測(cè)序； 步驟S1中單細(xì)胞樣品為腫瘤組織TIL細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、血液或骨髓單個(gè)核細(xì)胞、血液或骨髓中的NK稀有細(xì)胞，其中一種富集形成； 步驟S2中采用biotin-conjugated抗體對(duì)步驟S1獲得的單細(xì)胞樣品進(jìn)行生物素抗體孵育： 單細(xì)胞樣品由腫瘤組織TIL細(xì)胞形成時(shí)，biotin-conjugated抗體為biotin-conjugatedCD3抗體； 單細(xì)胞樣品由循環(huán)腫瘤細(xì)胞形成時(shí)，biotin-conjugated抗體為biotin-conjugatedpanCK抗體，其中包括CK8、CK18和CK19； 單細(xì)胞樣品由血液或骨髓單個(gè)核細(xì)胞形成時(shí)，biotinconjugated抗體為biotin-conjugatedCD45抗體； 單細(xì)胞樣品由血液或骨髓中的NK稀有細(xì)胞形成時(shí)，biotin-conjugated抗體為biotin-conjugatedCD56抗體； 步驟S2中加入的鏈霉親和素偶聯(lián)寡核苷酸的序列為SEQIDNO.1~SEQIDNO.12。

如需購(gòu)買、轉(zhuǎn)讓、實(shí)施、許可或投資類似專利技術(shù)，可聯(lián)系本專利的申請(qǐng)人或?qū)＠麢?quán)人武漢科技大學(xué)，其通訊地址為：430081 湖北省武漢市青山區(qū)和平大道947號(hào)；或者聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)官方客服，聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網(wǎng)”。