鼐濟醫藥科技(杭州)有限公司張忠亮獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉鼐濟醫藥科技(杭州)有限公司申請的專利一種基于AAV介導免疫微環境的腦膠質瘤動物模型構建方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN120272531B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-19發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510766997.X,技術領域涉及:C12N15/864;該發明授權一種基于AAV介導免疫微環境的腦膠質瘤動物模型構建方法是由張忠亮;方舒婷;張本佳設計研發完成,并于2025-06-10向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種基于AAV介導免疫微環境的腦膠質瘤動物模型構建方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種基于AAV介導免疫微環境的腦膠質瘤動物模型構建方法,包括:選擇適齡的免疫缺陷小鼠;注射人源CD34+造血干細胞進行免疫系統重建;檢測外周血PBMC中的人CD45+免疫細胞;選擇高表達腦膠質瘤標志基因的腫瘤組織,進行快速qPCR或靶向RNA?seq免疫組化多重驗證,篩選符合的腫瘤組織;將腫瘤組織進行物理切塊并經預處理液處理后,消化成單細胞懸液,接種于小鼠顱內;向小鼠尾靜脈注射攜帶特定免疫調控基因的AAV載體,調控腦膠質瘤免疫微環境;當觀察到腫瘤組織穩定生長并具有免疫細胞浸潤特征時,完成腦膠質瘤動物模型的構建。與現有模型相比,本發明提供了一種更穩定、更科學、更貼近人類免疫背景的腦膠質瘤模型,適用于相關免疫治療藥物篩選及機制研究。
本發明授權一種基于AAV介導免疫微環境的腦膠質瘤動物模型構建方法在權利要求書中公布了:1.一種基于AAV介導免疫微環境的腦膠質瘤動物模型構建方法,其特征在于,包括以下步驟: 選擇適齡的免疫缺陷小鼠; 通過尾靜脈注射人源CD34+造血干細胞進行免疫系統重建; 采用流式細胞術檢測外周血PBMC中的人CD45+免疫細胞,確認免疫系統重建成功; 選擇高表達腦膠質瘤標志基因的腫瘤組織,進行快速qPCR或靶向RNA-seq免疫組化多重驗證,篩選符合腦膠質瘤動物模型的腫瘤組織; 將篩選出的腫瘤組織進行物理切塊并經預處理液處理后,消化成單細胞懸液,采用立體定位注射方法將單細胞懸液接種于小鼠顱內; 向小鼠尾靜脈注射攜帶特定免疫調控基因的AAV載體,調控腦膠質瘤免疫微環境,當檢測到小鼠體內AAV表達產物穩定表達時,完成AAV表達產物介導的免疫調控; 當觀察到腫瘤組織穩定生長并具有免疫細胞浸潤特征時,確認免疫微環境重構與腫瘤生長符合模型構建要求,完成腦膠質瘤動物模型的構建; 所述AAV載體包括AAV-TGFβ1-P2A-IL10表達盒和AAV-CSF1表達盒,用于表達TGF-β1、IL10和CSF1基因; 所述AAV-TGFβ1-P2A-IL10表達盒包括由CAG啟動子驅動的TGF-β1基因與IL10基因通過P2A自切割肽序列共表達的核酸結構,核酸序列總長度為3.1±0.2kb; 所述AAV-CSF1表達盒包括由CAG啟動子驅動的CSF1基因表達單元,核酸序列總長度為2.3±0.2kb。
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