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龍圖騰網(wǎng)獲悉中國(guó)科學(xué)院南京土壤研究所申請(qǐng)的專(zhuān)利一種評(píng)價(jià)外源微生物在土壤中生長(zhǎng)情況的方法獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN115261498B 。

龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-19發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?專(zhuān)利號(hào)為：202210777730.7，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12Q1/689；該發(fā)明授權(quán)一種評(píng)價(jià)外源微生物在土壤中生長(zhǎng)情況的方法是由吳宇澄;陳禹竹;何健;曾軍;林先貴設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2022-07-04向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專(zhuān)利申請(qǐng)。

本一種評(píng)價(jià)外源微生物在土壤中生長(zhǎng)情況的方法在說(shuō)明書(shū)摘要公布了：本發(fā)明提出了一種評(píng)價(jià)外源微生物在土壤中生長(zhǎng)情況的方法，包括如下步驟：S1、于干燥土壤中添加外源微生物以及H2 18O進(jìn)行土壤培養(yǎng)試驗(yàn)，采集土壤樣品并提取土壤DNA；S2、分別以H2 16O和H2 18O配制用于培養(yǎng)外源微生物的液體培養(yǎng)基，收集所得外源微生物并提取DNA；S3、分別將S1中所得土壤DNA以及S2中菌體DNA樣品溶解于氯化銫溶液中進(jìn)行密度梯度離心，得不同DNA沿密度梯度的分布占比；S4、依據(jù)所得不同DNA的分布占比得土壤中外源微生物DNA的平均密度以實(shí)現(xiàn)外源微生物生長(zhǎng)程度的定量評(píng)價(jià)；本發(fā)明針對(duì)外源微生物獨(dú)特基因片段進(jìn)行定量PCR分析，能夠排除土壤中其他微生物的干擾，對(duì)外源微生物進(jìn)行高度特異的分析。

本發(fā)明授權(quán)一種評(píng)價(jià)外源微生物在土壤中生長(zhǎng)情況的方法在權(quán)利要求書(shū)中公布了：1.一種評(píng)價(jià)外源微生物在土壤中生長(zhǎng)情況的方法，其特征在于，包括如下步驟： S1、向干燥的土壤中添加外源微生物以及H2 18O進(jìn)行土壤培養(yǎng)試驗(yàn)，采集土壤樣品并提取土壤DNA； S2、分別以H2 16O和H2 18O配制用于培養(yǎng)外源微生物的液體培養(yǎng)基，收集所得外源微生物并提取DNA； S3、分別將S1中所得土壤DNA以及S2中16O及18O標(biāo)記的菌體DNA樣品溶解于氯化銫溶液中并進(jìn)行超高速密度梯度離心，得不同DNA沿密度梯度的分布占比； S4、依據(jù)S3中所得不同DNA的分布占比得土壤中外源微生物DNA的平均密度，從而實(shí)現(xiàn)外源微生物生長(zhǎng)程度的定量評(píng)價(jià)； 所述外源微生物為SphingomonaswittichiiDC-6，保藏于韓國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心（KoreanAgriculturalCultureCollection,KACC），保藏編號(hào)為KACC16600， 于S1-S3中，以定量PCR方法對(duì)所得DNA樣品進(jìn)行基因定量，所述定量PCR方法分析步驟如下， 進(jìn)行CndA基因的定量PCR測(cè)定，引物序列具體如下：CndAF：CATCCAGTGCCCCTATCACG；CndAR：AATCGCAGTCGAGATGCAGG； qPCR反應(yīng)； 對(duì)照外標(biāo)，計(jì)算獲得各浮力密度層DNA中CndA基因的拷貝數(shù)，進(jìn)行歸一化計(jì)算后，得出各浮力密度層中CndA的相對(duì)分布； 相應(yīng)S4中平均密度計(jì)算步驟如下， 采用加權(quán)平均法，計(jì)算18O-DNA、16O-DNA、Soil-DNA的平均浮力密度，公式為， ； 式中，為平均浮力密度；ρi為每一層的浮力密度；Ai指對(duì)應(yīng)每層CndA基因的相對(duì)豐度； 計(jì)算土壤DNA中18O標(biāo)記占比，公式為， 。

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