山東奧克斯畜牧種業有限公司張燕獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉山東奧克斯畜牧種業有限公司申請的專利一種牛體外胚胎一步法中冷凍液的添加劑及牛體外胚胎一步法冷凍方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN117502427B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-08發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202311346452.0,技術領域涉及:A01N1/126;該發明授權一種牛體外胚胎一步法中冷凍液的添加劑及牛體外胚胎一步法冷凍方法是由張燕;馬慶濤;王玲玲;高運東設計研發完成,并于2023-10-17向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種牛體外胚胎一步法中冷凍液的添加劑及牛體外胚胎一步法冷凍方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種牛體外胚胎一步法中冷凍液的添加劑及牛體外胚胎一步法冷凍方法,屬于動物胚胎冷凍保存及胚胎移植技術領域。本發明所述的添加劑為包含氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、葡萄糖、丙酮酸鈉、氯化鈣、牛血清白蛋白、蔗糖、乙二醇和透明質酸的水溶液;蔗糖的濃度為4.5~5.0M。本發明在牛體外胚胎一步法冷凍的基礎上,通過提高常規一步法冷凍液中蔗糖濃度并額外添加透明質酸,增加了冷凍液的滲透壓,有利于胚胎內部水分的排出,減少了冷凍過程中的胚胎內部冰晶形成,降低了冷凍過程對胚胎的損傷,提高牛體外胚胎冷凍解凍后的存活率、孵化率及解凍后胚胎的移植妊娠率。
本發明授權一種牛體外胚胎一步法中冷凍液的添加劑及牛體外胚胎一步法冷凍方法在權利要求書中公布了:1.一種牛體外胚胎一步法冷凍方法,其特征在于,包括如下步驟: 1配制添加劑; 2將所述添加劑與胚胎冷凍液混勻,得到含有添加劑的冷凍液; 3將所述含有添加劑的冷凍液與胚胎保存液混勻,得到平衡液滴; 4將待冷凍胚胎移入平衡液滴,靜置后,將待冷凍胚胎從平衡液滴移入含有添加劑的冷凍液中; 5將待冷凍胚胎裝入麥管,控制溫度進行冷凍; 所述添加劑中各組分濃度為:8gL氯化鈉、0.2gL氯化鉀、0.1gL氯化鎂、2.9gL磷酸氫二鈉、0.2gL磷酸二氫鉀、1gL葡萄糖、0.036gL丙酮酸鈉、0.1gL氯化鈣、4gL牛血清白蛋白、4.6M蔗糖、1.5M乙二醇、5mgmL透明質酸; 所述胚胎冷凍液為自制胚胎冷凍液或商業化胚胎冷凍液; 所述自制胚胎冷凍液為包含8gL氯化鈉、0.2gL氯化鉀、0.1gL氯化鎂、2.9gL磷酸氫二鈉、0.2gL磷酸二氫鉀、1gL葡萄糖、0.036gL丙酮酸鈉、0.1gL氯化鈣、4gL牛血清白蛋白、0.1M蔗糖、1.5M乙二醇的水溶液; 按照8:2的體積比將胚胎冷凍液與一步法冷凍液添加劑混合均勻后形成含有添加劑的冷凍液; 按照1:1的體積比將胚胎保存液和含有添加劑的冷凍液混合均勻后形成平衡液滴;平衡液滴滲透壓處于胚胎保存液與含有添加劑的冷凍液之間,處理胚胎時,胚胎所處環境處于滲透壓穩步升高; 所述將待冷凍胚胎裝入麥管為:按照胚胎保存液、氣泡、胚胎保存液、氣泡、含有胚胎的含有添加劑的冷凍液、氣泡、胚胎保存液、氣泡、胚胎保存液的順序進行五段式裝管,其中每段液柱的長度相同,將胚胎裝入麥管中。
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