北京清華長庚醫院曹洋獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉北京清華長庚醫院申請的專利一種快速檢測與GBS相關的易感基因Siglec14/5及其融合突變的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116064857B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-08發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202211045147.3,技術領域涉及:C12Q1/689;該發明授權一種快速檢測與GBS相關的易感基因Siglec14/5及其融合突變的方法是由曹洋;汪大為;曾楨;張蕾;鹿陽;馮慧軍;李淑華;廖秦平設計研發完成,并于2022-08-30向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種快速檢測與GBS相關的易感基因Siglec14/5及其融合突變的方法在說明書摘要公布了:本發明提供了一種快速檢測與GBS相關的易感基因Siglec145及其融合突變的方法,即向同一管中添加第一輪Siglec145融合突變基因的PCR擴增引物、第二輪靶向融合突變基因的qPCR檢測引物和探針、以及靶向野生型正常Siglec14與Siglec5基因之間非編碼區序列的qPCR檢測引物和探針,通過調整變性?退火?延伸各反應步驟的溫度變化,連續進行PCR和qPCR兩輪反應,互相無干擾,利用熒光信號的不同一次性做到對Siglec145基因的野生型、缺失突變型、雜合型進行有效區分。本申請較傳統PCR加電泳法速度更快,操作更加方便,檢測過程全程閉管,不容易產生氣溶膠污染,易于大范圍推廣。
本發明授權一種快速檢測與GBS相關的易感基因Siglec14/5及其融合突變的方法在權利要求書中公布了:1.一種非疾病診斷治療目的的快速檢測與GBS相關的易感基因Siglec145及其融合突變的方法,其特征在于:向同一管中添加三組引物組及探針,連續進行PCR和qPCR兩輪反應,其中,所述引物包括第一輪Siglec145融合突變基因的PCR擴增引物、第二輪靶向融合突變基因的qPCR檢測引物和探針以及靶向野生型正常Siglec14與Siglec5基因之間非編碼區序列的qPCR檢測引物和探針; 所述第一輪Siglec145融合突變基因的PCR擴增引物具體序列如下: Siglec-L-F-1:5’-CAGCCCAGCTCTGTGGTTCTTCTCTCACCCTT-3’; Siglec-L-R-1序列按照O區域、A區域到R區域的順序,從5’端-3’端順序串聯組成,具體序列如下: R區域:5’-AGGTCAGGAGTTCAAGATCAGCTTGGCCGACAT-3’; O區域:5’-GAGTCTAGAATCGATCAGTAACTCAGCT-3’; A區域:5’-CTCCACCACTCTACTCATGCCACCCCTACC-3’; 所述第二輪靶向融合突變基因的qPCR檢測引物和探針具體序列如下: Siglec-S-F-1:5’-GGATTACAGGTGCACATCATCACGCCTGGCTA-3’; Siglec-S-R-1:5’-GAGTCTAGAATCGATCAGTAACTCAGC-3’; Siglec-S-P-1:5’-熒光報告基-CCACCACTCTACTCATGCCACCCCTAC -BHQ1-3’; 所述第二輪靶向野生型正常Siglec14與Siglec5基因之間非編碼區序列的qPCR檢測引物和探針具體序列如下: Siglec-GAP-F-1:5’-ACTTGATCTGTGGCCTGTATACAAT-3’; Siglec-GAP-R-1:5’-CAGGTATGAGCCACCGCACCC-3’; Siglec-GAP-P-1:5’-熒光報告基因-CACCCCTCACTCCCACTG- MGB-3’; 或者, 所述第一輪Siglec145融合突變基因的PCR擴增引物具體序列如下: Siglec-L-F-2:5’-CTAAGGACCACTCCATGCCCCTCTCATCTCAGTC A-3’; Siglec-L-R-2序列按照O區域、A區域到R區域的順序,從5’端-3’端順序串聯組成,具體序列如下: R區域:5’-AGAGAGGCCAAGAGATATAAAAGCGCACCAA-3’; O區域:5’-CTAGCTTAGGCCATAGCAGAATCACGTGCA-3’; A區域:5’-ATCGCTGCAGTCGATTGGACCATGCAA-3’; 所述第二輪靶向融合突變基因的qPCR檢測引物和探針具體序列如下: Siglec-S-F-2:5’-GTATGAGCAACATAGCAAGACTCTCGCC-3’; Siglec-S-R-2:5’-GCACGTGATTCTGCTATGGCCTAAG-3’; Siglec-S-P-2:5’-熒光報告基因-TCGCTGCAGTCGATTGGACCATGCA -BHQ1-3’; 所述第二輪靶向野生型正常Siglec14與Siglec5基因之間非編碼區序列的qPCR檢測引物和探針具體序列如下: Siglec-GAP-F-2:5’-CTTCTTGGCTATGATGCATAACACT-3’; Siglec-GAP-R-2:5’-ACTGAATTTCCATCATATAGACCCC-3’; Siglec-GAP-P-2:5’-熒光報告基-CTATGACCATTCCTGCCATGGTTTT GT-MGB-3’; 探針可以是普通Taqman探針或相同序列的MGB探針;探針中的熒光報告基團可以是FAM、VIC、CY5、ROX、SYTO-9通道中任意兩種不同的標記; 其中,第一輪PCR引物Tm值高于第二輪qPCR引物Tm值,兩輪PCR反應均分別經過高溫變性和退火延伸的過程,且第一輪PCR的退火溫度大于第二輪qPCR退火溫度; 在第二輪qPCR中利用熒光信號的不同一次性對Siglec基因的野生型、突變型、雜合型進行有效區分; 當在第二輪靶向融合突變基因探針所帶的熒光報告基團的通道內有典型的S型擴增曲線的為突變型,在第二輪靶向野生型正常Siglec14與Siglec5基因探針所帶的熒光報告基團的通道內有典型的S型擴增曲線的為野生型;當兩個通道均有S型擴增曲線的為雜合型。
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