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龍圖騰網(wǎng)獲悉揚(yáng)州大學(xué)申請的專利一種基于Au@CuZn-ZIF納米酶探針的化學(xué)發(fā)光成像免疫檢測方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN116482351B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-12發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：202310413968.6，技術(shù)領(lǐng)域涉及：G01N33/535；該發(fā)明授權(quán)一種基于Au@CuZn-ZIF納米酶探針的化學(xué)發(fā)光成像免疫檢測方法是由楊占軍;姜國敏;李娟;石鳳;吉爽爽;孟廣宇設(shè)計研發(fā)完成，并于2023-04-18向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本一種基于Au@CuZn-ZIF納米酶探針的化學(xué)發(fā)光成像免疫檢測方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明涉及免疫學(xué)分析檢測技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)一種基于Au@CuZn?ZIF納米酶探針的化學(xué)發(fā)光成像免疫檢測方法，首先制備Au@CuZn?ZIF納米酶并在其表面修飾羧基，連接二級抗體Ab2制得Au@CuZn?ZIF?Ab2納米酶探針；然后將抗原分子和Au@CuZn?ZIF?Ab2納米酶探針滴加到一級抗體Ab1修飾的環(huán)氧基活化載體片表面，溫育形成三明治夾心的化學(xué)發(fā)光成像免疫傳感器，實(shí)現(xiàn)對抗原分子的高靈敏檢查。本發(fā)明中，將Au@CuZn?ZIF納米酶具有的類過氧化物酶活性可催化過氧化氫生成強(qiáng)氧化性羥基自由基觸發(fā)魯米諾產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號，利用化學(xué)發(fā)光信號與抗原濃度之間的線性關(guān)系可實(shí)現(xiàn)抗原的檢測。同時Au@CuZn?ZIF納米酶中銅離子的引入增強(qiáng)了復(fù)合材料的類酶催化活性與穩(wěn)定性，再結(jié)合三明治夾心法，提高了蛋白質(zhì)分子檢測的靈敏度和特異性。

本發(fā)明授權(quán)一種基于Au@CuZn-ZIF納米酶探針的化學(xué)發(fā)光成像免疫檢測方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種基于Au@CuZn-ZIF納米酶探針的化學(xué)發(fā)光成像免疫檢測方法，其特征在于，通過如下步驟制備得到： 第1步，制備Au@CuZn-ZIF納米酶并在其表面修飾羧基，連接二級抗體Ab2制得Au@CuZn-ZIF-Ab2納米酶探針，包括如下分步： 1.1首先將ZnNO32·6H2O和CuNO32·3H2O溶于甲醇中形成A液，再將2-甲基咪唑溶于甲醇中形成B液，將A液逐滴滴加入B液，常溫攪拌反應(yīng)30-60min，然后離心收集并洗滌混合液中的固相產(chǎn)品，得到CuZn-ZIF納米粒子； 1.2將CuZn-ZIF納米粒子溶于水形成溶液，加入到嵌段式聚醚F-127水溶液中，常溫攪拌30-60min，加入HAuCl4溶液，再常溫攪拌30-60min后加入NaBH4溶液，繼續(xù)攪拌兩個小時，然后離心收集洗滌混合液中的固相產(chǎn)品，得到Au@CuZn-ZIF納米酶； 1.3將Au@CuZn-ZIF納米酶溶于磷酸緩沖溶液中，加入11-疏基十一烷酸（MUA）溶液以在Au@CuZn-ZIF表面修飾羧基，接著用1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺混合溶液活化羧基，再加入二級抗體，4℃下攪拌3h，然后繼續(xù)在4℃下離心洗滌，得到Au@CuZn-ZIF-Ab2納米酶探針，分散于磷酸緩沖溶液中低溫儲藏； 第2步，將抗原分子和Au@CuZn-ZIF-Ab2納米酶探針滴加到一級抗體Ab1修飾的環(huán)氧基活化載體片表面，溫育形成三明治夾心的化學(xué)發(fā)光成像免疫傳感器，實(shí)現(xiàn)對抗原分子的檢查，包括以下分步驟： 2.1利用絲網(wǎng)印刷技術(shù)并借助模板在環(huán)氧硅烷化的載玻片表面制作反應(yīng)微孔陣列； 2.2將一級抗體Ab1溶液與殼聚糖溶液混合，振蕩均勻后滴入反應(yīng)陣列的微孔中，在4℃下保存12小時； 2.3在微孔表面滴加牛血清白蛋白溶液，于4℃環(huán)境中密封溫育12小時封閉未結(jié)合位點(diǎn)，然后用磷酸鹽緩沖溶液沖洗并在室溫下晾干； 2.4在不同的微孔表面分別滴加一系列已知濃度的抗原溶液與未知濃度的抗原溶液分別與Ab1反應(yīng)，室溫溫育半個小時，然后用磷酸鹽緩沖溶液沖洗并在室溫下晾干； 2.5在微孔表面滴加Au@CuZn-ZIF-Ab2納米酶探針與抗原反應(yīng)，室溫下溫育半個小時，然后用磷酸鹽緩沖溶液沖洗并在室溫下晾干； 2.6配制發(fā)光底物，滴入微孔表面，即時放入全自動發(fā)光成像系統(tǒng)檢測發(fā)光強(qiáng)度； 2.7根據(jù)已經(jīng)已知濃度的抗源溶液對應(yīng)的2.6分步中發(fā)光強(qiáng)度的檢測，描制發(fā)光信號與抗原濃度之間線性關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線；再將未知抗源濃度對應(yīng)的發(fā)光強(qiáng)度對應(yīng)描點(diǎn)制所述標(biāo)準(zhǔn)曲線對應(yīng)的坐標(biāo)位置，確定抗原濃度。

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