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      重慶醫科大學羅蓉獲國家專利權

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      龍圖騰網獲悉重慶醫科大學申請的專利基于無限拉鏈式雜交鏈式反應的miRNA檢測用組合物、熒光生物傳感器及其構建方法與應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119639898B

      龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-15發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202411856119.9,技術領域涉及:C12Q1/6886;該發明授權基于無限拉鏈式雜交鏈式反應的miRNA檢測用組合物、熒光生物傳感器及其構建方法與應用是由羅蓉;劉露;陳君曼設計研發完成,并于2024-12-17向國家知識產權局提交的專利申請。

      基于無限拉鏈式雜交鏈式反應的miRNA檢測用組合物、熒光生物傳感器及其構建方法與應用在說明書摘要公布了:本發明公開了一種基于無限拉鏈式雜交鏈式反應ZHCR的miRNA檢測用組合物、熒光生物傳感器及其構建方法與應用。本發明將HCR與PER相結合,利用PER生成的單鏈DNA產物作為固定發夾的軌道,分別與HCR的帶腿發夾H1?l、H2?l反應結合生成ZH1和ZH2;還根據miRNA序列設計了靶標識別單元,當靶標miRNA與之結合后,封閉鏈脫落,暴露引發序列,引發ZH2與ZH1發生ZHCR,產生熒光信號。本發明反應底物制備和序列設計簡單,能使游離發夾定位在長軌道上,從而提高反應速率,實現體外對miRNA的等溫、快速、靈敏的擴增,能為活細胞內miRNA高效成像及體外檢測提供一個有前景的新平臺。

      本發明授權基于無限拉鏈式雜交鏈式反應的miRNA檢測用組合物、熒光生物傳感器及其構建方法與應用在權利要求書中公布了:1.一種用于檢測miRNA的組合物,其特征在于,包括第一組分、第二組分和第三組分; 所述第一組分包括引物; 所述第二組分包括帶腿發夾H1-l和帶腿發夾H2-l; 所述引物經引物交換反應生成一條線性單鏈DNA,所述線性單鏈DNA含重復的短DNA序列;所述線性單鏈DNA與若干個所述帶腿發夾H1-l雜交結合形成DNA雙鏈ZH1,所述線性單鏈DNA與若干個所述帶腿發夾H2-l雜交結合形成DNA雙鏈ZH2; 所述第三組分包括DNA雙鏈IMB; 所述DNA雙鏈IMB包括DNA單鏈IM和封閉鏈B,所述DNA單鏈IM包括引發鏈I和miRNA識別序列M;所述miRNA識別序列M與目標miRNA的核苷酸序列部分或完全互補; 所述miRNA識別序列M與目標miRNA結合后,所述DNA雙鏈IMB中的封閉鏈B會脫落,暴露出所述引發鏈I,所述引發鏈I依次與所述DNA雙鏈ZH2和DNA雙鏈ZH1發生無限拉鏈式雜交鏈式反應,形成長拉鏈式DNA聚合物; 所述引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示; 所述第一組分還包括催化發夾和清潔發夾G,所述催化發夾的核苷酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示,所述清潔發夾G的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示; 所述線性單鏈DNA的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示; 所述帶腿發夾H1-l的核苷酸序列包括從5’端至3’端依次連接的片段1、片段2和片段3,所述帶腿發夾H2-l的核苷酸序列包括從5’端至3’端依次連接的片段4、片段2和片段1,所述片段1的核苷酸序列包括GTTAAGTTGTGTTAAGTTGT,所述片段2的核苷酸序列包括0~10個連續的堿基T,所述片段3的核苷酸序列包括如SEQIDNO.6所示的核苷酸序列,所述片段4的核苷酸序列包括如SEQIDNO.7所示的核苷酸序列; 所述引發鏈I的核苷酸序列如SEQIDNO.19所示。

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