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龍圖騰網(wǎng)獲悉南京啟真基因工程有限公司申請(qǐng)的專利用于構(gòu)建HNF1A基因突變的糖尿病模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN115247153B 。

龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-08發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202110676866.4，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N5/10；該發(fā)明授權(quán)用于構(gòu)建HNF1A基因突變的糖尿病模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用是由牛冬;汪滔;段星;劉璐;馬翔;陶裴裴;曾為俊;王磊;程銳;趙澤英;黃彩云設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2021-06-18向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本用于構(gòu)建HNF1A基因突變的糖尿病模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用在說(shuō)明書摘要公布了：本發(fā)明公開了用于構(gòu)建HNF1A基因突變的MODY模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種制備重組細(xì)胞的方法：用SEQIDNO：18所示的DNA分子取代豬細(xì)胞的染色體DNA中SEQIDNO：19所示的DNA分子，得到重組細(xì)胞。具體實(shí)現(xiàn)方式：將靶序列結(jié)合區(qū)如SEQIDNO：16中第3?22位核苷酸所示的HNF1A?gU2、靶序列結(jié)合區(qū)如SEQIDNO：17中第3?22位核苷酸所示的HNF1A?gD1、SEQIDNO：18所示的HNF1A?mutant?ss163和NCN蛋白共轉(zhuǎn)染豬細(xì)胞。將所述重組細(xì)胞作為核移植供體細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞克隆，可以得到克隆豬，即為MODY3型糖尿病模型豬。本發(fā)明對(duì)于MODY3型糖尿病藥物的研發(fā)及揭示該病的發(fā)病機(jī)制具有重大應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明授權(quán)用于構(gòu)建HNF1A基因突變的糖尿病模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用在權(quán)利要求書中公布了：1.一種制備重組細(xì)胞的方法，包括如下步驟：用SEQIDNO：18所示的DNA分子取代豬成纖維細(xì)胞的染色體DNA中SEQIDNO：19所示的DNA分子，得到重組細(xì)胞； 用SEQIDNO：18所示的DNA分子取代豬成纖維細(xì)胞的染色體DNA中SEQIDNO：19所示的DNA分子的實(shí)現(xiàn)方式為：將HNF1A-gU2、HNF1A-gD1、HNF1A-mutant-ss163和NCN蛋白共轉(zhuǎn)染豬成纖維細(xì)胞；所述HNF1A-gU2為sgRNA，其靶序列結(jié)合區(qū)如SEQIDNO：16中第3-22位核苷酸所示；所述HNF1A-gD1為sgRNA，其靶序列結(jié)合區(qū)如SEQIDNO：17中第3-22位核苷酸所示；所述HNF1A-mutant-ss163為SEQIDNO：18所示的單鏈DNA分子； 所述NCN蛋白如SEQIDNO：3所示； 所述NCN蛋白的制備方法包括如下步驟： 1將質(zhì)粒pKG-GE4導(dǎo)入大腸桿菌BL21DE3，得到重組菌； 2采用液體培養(yǎng)基30℃培養(yǎng)所述重組菌，然后加入IPTG并25℃誘導(dǎo)培養(yǎng)，然后收集菌體； 3將收集的菌體進(jìn)行菌體破碎，收集粗蛋白溶液； 4采用親和層析從所述粗蛋白溶液中純化具有His6標(biāo)簽的融合蛋白； 5采用具有His6標(biāo)簽的腸激酶酶切具有His6標(biāo)簽的融合蛋白，然后采用Ni-NTA樹脂去除具有His6標(biāo)簽的蛋白，得到純化的NCN蛋白； 所述質(zhì)粒pKG-GE4如SEQIDNO：1所示。

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