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龍圖騰網(wǎng)獲悉江蘇省農(nóng)業(yè)科學院申請的專利一種從玻璃化冷凍囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干細胞的方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN114836374B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-12發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：202210457597.7，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N5/0735；該發(fā)明授權(quán)一種從玻璃化冷凍囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干細胞的方法是由趙芳;王慧利;高運東;丁強;陳坤琳;夏淑雯;錢勇;仲躋峰設(shè)計研發(fā)完成，并于2022-04-28向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本一種從玻璃化冷凍囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干細胞的方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了一種從玻璃化冷凍囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干細胞的方法。本發(fā)明采用冷凍囊胚與胚胎干細胞衍生階段特定培養(yǎng)液相結(jié)合，建立一種穩(wěn)定的奶牛胚胎干細胞衍生體系，其囊胚粘附生成outgrowth的概率≥80％，胚胎干細胞建系效率≥50％。利用本發(fā)明，解決了利用鮮胚衍生奶牛胚胎干細胞時效緊迫的問題，提高了奶牛胚胎干細胞建系效率及穩(wěn)定性，有助于高效建立體外育種模型，加快育種進程，降低育種成本，對奶牛新品種系培育具有重要的實踐價值。

本發(fā)明授權(quán)一種從玻璃化冷凍囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干細胞的方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種從玻璃化冷凍囊胚中衍生荷斯坦牛胚胎干細胞的方法，其特征在于在復(fù)蘇的荷斯坦牛玻璃化冷凍囊胚進行衍生的三個階段分別使用特定的細胞培養(yǎng)液進行培養(yǎng)；第Ⅰ階段：分離囊胚內(nèi)細胞團至貼附階段，使用Ⅰ型細胞培養(yǎng)液進行培養(yǎng),Ⅰ型細胞培養(yǎng)液配方為：改良mTeSR培養(yǎng)基+8-10%FBS+10-15μMY27632；第Ⅱ階段：內(nèi)細胞團貼附至細胞傳代階段，待細胞貼附后，將細胞培養(yǎng)液更換為Ⅱ型細胞培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3-5天使細胞團形成體外衍生物（outgrowth），對體外衍生物用TrypLE消化2-3min，加入DPBS終止消化，并用移液器輕輕吹打成小細胞團，離心去除上清，加入第Ⅰ階段培養(yǎng)液，吹打均勻后接種于MEF飼養(yǎng)層上，放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，所述的Ⅱ型細胞培養(yǎng)液：改良mTeSR培養(yǎng)基+8-10%FBS；第Ⅲ階段：傳代24h后細胞培養(yǎng)階段，使用Ⅲ型細胞培養(yǎng)液：改良mTeSR培養(yǎng)基+3-8%KSR；所述的改良mTeSR培養(yǎng)基是以在mTeSR1培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加終濃度為0.979mMGABA、0.984μMPipecolicAcid、0.98mMLiCl、20ngmLActivinA、20ngmLhumanFGF2、0.1mMβ-巰基乙醇和2.5μMIWR1配制而成。

如需購買、轉(zhuǎn)讓、實施、許可或投資類似專利技術(shù)，可聯(lián)系本專利的申請人或?qū)＠麢?quán)人江蘇省農(nóng)業(yè)科學院，其通訊地址為：210014 江蘇省南京市鐘靈街50號；或者聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)官方客服，聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網(wǎng)”。