北京航空航天大學杭州創新研究院;杭州樂為生醫科技有限公司高陽獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉北京航空航天大學杭州創新研究院;杭州樂為生醫科技有限公司申請的專利一種基于鄰位連接的多靶標同時檢測方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN120102908B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-19發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510595605.8,技術領域涉及:C12Q1/6804;該發明授權一種基于鄰位連接的多靶標同時檢測方法是由高陽;韓改凈設計研發完成,并于2025-05-09向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種基于鄰位連接的多靶標同時檢測方法在說明書摘要公布了:本發明屬于生物檢測技術領域,具體涉及一種基于鄰位連接的多靶標同時檢測方法,包括采用包被了識別不同靶標的抗體的多種微珠來同時富集多種靶分子,并與鄰位探針結合,隨后使用夾板探針來連接處于鄰位的探針,最后通過qPCR檢測實現了多種不同靶分子的檢測;本發明的方法不僅可以同時檢測多種不同的靶分子,而且與常規方法相比具有更高的檢測準確度。
本發明授權一種基于鄰位連接的多靶標同時檢測方法在權利要求書中公布了:1.一種基于鄰位連接的多靶標同時檢測方法,其特征在于,包括以下步驟: (a)提供多種微珠復合物,所述多種微珠復合物各自包含: (i)微珠載體;和 (ii)固定在所述微珠載體表面的特異性結合靶分子的第一抗體; 其中不同微珠復合物上固定的第一抗體各自特異性結合不同的靶分子; (b)將所述多種微珠復合物與待測樣品孵育,使得不同微珠復合物上固定的第一抗體與其各自的靶分子結合; (c)將所述多種微珠復合物與待測樣品分離,得到結合了不同靶分子的多種微珠復合物; (d)將結合了不同靶分子的多種微珠復合物與多種第一鄰位探針和第二鄰位探針對孵育,所述多種第一鄰位探針和第二鄰位探針對分別對應于不同的靶分子,其中所述第一鄰位探針包含偶聯至第一寡核苷酸的5’端的第二抗體,所述第二鄰位探針包含偶聯至第二寡核苷酸的3’端的第三抗體,每對第一鄰位探針和第二鄰位探針中的第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的序列在多種第一鄰位探針和第二鄰位探針對之間不同但所有第一寡核苷酸的3’端具有相同的第一銜接子序列和所有第二寡核苷酸的5’端具有相同的第二銜接子序列,并且每對第一鄰位探針和第二鄰位探針中的第二抗體和第三抗體各自結合與該第一鄰位探針和第二鄰位探針對所對應的靶分子上的不同表位,從而得到結合了多種第一鄰位探針和第二鄰位探針對的多種微珠復合物; (e)將步驟(d)的多種微珠復合物與夾板探針孵育,所述夾板探針由位于兩端的短發夾和位于中間的雜交區組成,所述雜交區包含分別與第一銜接子序列和第二銜接子序列互補的互補序列,使得第一寡核苷酸的3’端和第二寡核苷酸的5’端通過與夾板探針雜交而相互鄰近; 所述夾板探針兩端的短發夾各自具有長度為4-6個堿基的環和長度為4-6個堿基對的反向互補雙鏈; 所述夾板探針中間的雜交區為單鏈,其長度為8-12個堿基,其中與第一銜接子序列互補的互補序列的長度為4-6個堿基,和與第二銜接子序列互補的互補序列的長度為4-6個堿基; (f)將步驟(e)的多種微珠復合物與DNA連接酶孵育,使得鄰近的第一寡核苷酸的3’端與第二寡核苷酸的5’端連接在一起; (g)將步驟(f)的多種微珠復合物與包含多種引物對的qPCR反應體系混勻,并進行qPCR反應,從而確定靶分子或相互作用的兩種靶分子的存在。
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